EYA4基因在食管鱗癌中的甲基化狀態(tài)及其抑制食管鱗癌細胞侵襲轉移的機制研究.pdf

1、在全世界范圍內，食管癌的發(fā)病率在全部惡性腫瘤中排名第8位，其死亡率在全部惡性腫瘤中排名第6位。在世界各地，食管鱗癌都是食管癌的主要病理類型，尤其是在作為食管癌高發(fā)區(qū)的中國，食管鱗癌占食管癌總數(shù)的90％以上。在過去的幾十年中，雖然在食管癌的診療各方面都取得了較大的進步，但是食管癌的總體生存率仍然沒有明顯改善，五年總體生存率不足14％。腫瘤的復發(fā)和轉移是食管癌預后差的主要原因之一。因此，研究食管癌發(fā)生發(fā)展過程中具體的分子機制，有助于尋找具有

2、臨床應用價值的治療新靶點，為食管癌的治療提供新的治療思路和策略。
　　EYA4是一種非巰基蛋白酪氨酸磷酸酶，在哺乳動物的組織器官發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用，并參與DNA損傷修復、細胞凋亡、血管生成等生理過程。近年來有研究表明，EYA基因家族成員在多種腫瘤中存在異常甲基化和表達異常的現(xiàn)象。在本研究中，我們對EYA4基因在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及其機制進行了初步探討。
　　我們運用MSP和BSP技術對50例食管鱗癌和癌旁組織以

3、及8株食管鱗癌細胞系中EYA4基因啟動子區(qū)的甲基化水平進行了檢測。結果發(fā)現(xiàn)，在食管鱗癌組織中EYA4基因存在普遍的高甲基化現(xiàn)象，其甲基化比率(80％，40/50)明顯高于癌旁組織(58％，29/50)。在8株食管鱗癌細胞系中，KYSE30中EYA4基因啟動子區(qū)為完全非甲基化狀態(tài)，其余7株細胞系均有不同程度的甲基化，其甲基化比率為87.5％(7/8)。進一步通過實時定量PCR技術分析這8株食管鱗癌細胞系中EYA4 mRNA表達水平發(fā)現(xiàn)，K

4、YSE30細胞系高表達EYA4，其余7株細胞系均低表達EYA4。而且在經(jīng)過5-aza-dC或TSA藥物誘導后，食管鱗癌細胞系中EYA4基因的表達水平明顯升高。
　　通過慢病毒載體系統(tǒng)在食管鱗癌細胞KYSE30中敲降EYA4基因能夠促進腫瘤細胞的遷移和侵襲能力，反之，在食管鱗癌細胞KYSE180和KYSE450中過表達EYA4基因能夠抑制腫瘤細胞的遷移。尾靜脈注射肺定植的體內實驗也證實EYA4基因能夠抑制食管鱗癌細胞的遠處轉移。進一

5、步探討其機制發(fā)現(xiàn)，EYA4能夠抑制AKT/GSK3β/slug信號通路的激活，促進E-cadherin的表達，抑制vimentin、MMP2、MMP9和MMP13的表達，從而發(fā)揮抑制腫瘤細胞侵襲轉移的作用。
　　TGF-β1是食管癌細胞發(fā)生EMT過程中重要的誘導因子。在本研究中發(fā)現(xiàn)，TGF-β1能夠誘導食管鱗癌細胞發(fā)生明顯的EMT，表現(xiàn)為細胞形態(tài)學的變化及EMT相關分子的表達改變，同時伴有EYA4表達的明顯減少。深入探討TGF-β

6、1誘導EYA4表達下調的機制發(fā)現(xiàn)，TGF-β1通過上調DNA甲基化酶DNMT1和DNMT3A的表達，可能誘導EYA4基因啟動子區(qū)的甲基化，從而下調EYA4的表達水平。而且，在食管鱗癌細胞中，過表達EYA4能夠通過抑制TGF-β1誘導的E-cadherin表達下降，vimentin和MMPs表達升高，從而抑制TGF-β1誘導的EMT。
　　此外，在食管鱗癌細胞中，EYA4基因還能促進DNA損傷的修復，抑制順鉑誘導的細胞凋亡，維持基因