水甘油通道蛋白基因StFPS1對玉米大斑病菌生長發(fā)育及侵染能力的影響.pdf

1、本實驗室在前期研究中已經獲得了玉米大斑病菌水甘油通道蛋白基因StFPS1，本研究在此基礎上，采用RNAi技術獲得了該基因的沉默轉化子;通過比較轉化子與野生型菌株在生長發(fā)育、侵入能力及其對高滲透脅迫的反應，明確該基因的功能。主要研究結果如下:
　　(1)以pSilent-1質粒為基本骨架，構建了玉米大斑病菌水甘油通道蛋白基因StFPS1的RNAi載體，轉化野生型菌株原生質體，利用潮霉素B抗性、RT-PCR篩選得到了2株StFPS1基

2、因的RNAi轉化子，分別命名為fps1-1和fps1-2;利用Real-time RCR技術確定轉化子中StFPS1基因表達水平分別為野生型的0.34％和5.49％。
　　(2)與野生型菌株相比，轉化子在PDA培養(yǎng)基上生長速度降低，產孢量降低，基因沉默較強的菌株（fps1-1）失去產孢能力;菌絲分隔變長，細胞膨大，且基因沉默強的菌株（fps1-1）菌絲出現彎曲。表明StFPS1基因與玉米大斑病菌菌絲發(fā)育及分生孢子的產量密切相關。<

3、br>　　(3)在0.5M NaCl高滲脅迫處理下，與野生型菌株相比，轉化子菌落生長速率受抑制程度低;轉化子菌絲細胞膨大為球型，分隔增多，間距變短，菌絲內甘油含量明顯高于野生型。說明StFPS1基因參與玉米大斑病菌高滲脅迫反應，且起負調控作用。
　　(4)與野生型相比，轉化子fps1-2附著胞發(fā)育延遲，能穿透玻璃紙，轉化子fps1-1不產生附著胞，不能穿透玻璃紙。說明StFPS1基因影響玉米大斑病菌附著胞發(fā)育及侵染能力。
　

4、　(5)通過透射電鏡觀察發(fā)現，與野生型相比，轉化子fps1-1細胞壁明顯變薄;轉化子對Congo red、CFW、SDS等細胞壁合成抑制劑的敏感性下降。說明StFPS1基因與玉米大斑病菌細胞壁的形態(tài)建成密切相關。
　　(6)利用Real-time RCR技術分析轉化子中HOG-MAPK級聯途徑和CWI-MAPK級聯途徑關鍵基因（StSHO1、StHOG1、 StSLT2）基因的表達水平，發(fā)現與野生型相比基因表達水平均明顯下降。預示