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文檔簡介
1、目的：研究重組腺病毒(AV)為載體的心肌漿網(wǎng)肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶(SERCA2a)基因轉(zhuǎn)導(dǎo)對(duì)慢性心力衰竭犬離體心肌細(xì)胞收縮功能的影響。
方法：分對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,對(duì)照組犬即假手術(shù)組,實(shí)驗(yàn)組犬通過快速起搏建立犬的慢性心衰模型。通過膠原酶消化法分離犬心肌細(xì)胞,將分離的心肌細(xì)胞分為未轉(zhuǎn)染組、轉(zhuǎn)染EGFP組、染轉(zhuǎn)EGFP+SERCA2a三組培養(yǎng)48小時(shí),通過免疫印跡法檢測各組心肌細(xì)胞SERCA2a蛋白表達(dá)水平,利用單細(xì)胞收縮動(dòng)態(tài)
2、邊緣檢測系統(tǒng)(IonOptix)測定即刻分離和48小時(shí)各組心肌細(xì)胞收縮功能的改變。
結(jié)果： Western blotting檢測SERCA2a表達(dá)水平,與對(duì)照組心肌細(xì)胞組相比,心衰組SERCA2a蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.01),心衰組轉(zhuǎn)染SERCA2a基因48小時(shí)后蛋白表達(dá)基本恢復(fù)對(duì)照組水平(P>0.05)。與對(duì)照組相比,即刻分離的心衰組的心肌細(xì)胞基礎(chǔ)收縮(1mM)收縮幅度百分比明顯降低(3.241±1.260％vs1.
3、479±0.606％,P<0.01)；與心衰心肌細(xì)胞未轉(zhuǎn)染組相比,過表達(dá)SERCA2a后心衰心肌細(xì)胞基礎(chǔ)收縮(1mMCa2+濃度)和最大收縮(激動(dòng)劑刺激)均明顯改善[(1.000±0.366％vs3.339±0.907％。P<0.01)和(5.535±2.7707％vs11.233±2.574％P<0.01)]:與對(duì)照組未轉(zhuǎn)染組相比,轉(zhuǎn)染SERCA2a心衰心肌細(xì)胞基礎(chǔ)收縮收縮幅度百分比恢復(fù)至對(duì)照組水平[(2.053±1.567)％vs(
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