實(shí)時熒光PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)基因植物的初步研究.pdf

1、自轉(zhuǎn)基因生物問世以來,許多農(nóng)業(yè)公司利用包括轉(zhuǎn)基因技術(shù)在內(nèi)的現(xiàn)代生物技術(shù)開發(fā)出了很多新的植物品系。由于轉(zhuǎn)基因存在的安全性問題使得轉(zhuǎn)基因生物產(chǎn)品的標(biāo)簽問題成為公眾關(guān)注的主要熱點(diǎn),標(biāo)識制度的推行增加了消費(fèi)者的知情權(quán)和選擇權(quán),目前已有30個國家制定了相應(yīng)的法律法規(guī)對轉(zhuǎn)基因作物及其衍生產(chǎn)品進(jìn)行標(biāo)簽,而標(biāo)識制度的有效監(jiān)督和實(shí)施在某種程度上依賴于轉(zhuǎn)基因檢測水平的不斷提高。目前,許多未經(jīng)標(biāo)簽和認(rèn)證的轉(zhuǎn)基因生物及其深加工產(chǎn)品可能已經(jīng)進(jìn)入中國市場,這就迫切

2、需要合適的檢測手段以確定這些食品中是否含有轉(zhuǎn)基因成分。
　　實(shí)時熒光定量PCR技術(shù),是近幾年發(fā)展起來的一項(xiàng)分子生物學(xué)檢測技術(shù),由于它使用了熒光標(biāo)記,提高了檢測的準(zhǔn)確性和靈敏度,不需對PCR產(chǎn)物進(jìn)行后期處理,避免了交叉污染,克服了以往PCR技術(shù)中存在的假陽性污染和不能進(jìn)行準(zhǔn)確定量的缺點(diǎn),同時也提高了檢測速度和自動化程度,目前已經(jīng)被廣泛的應(yīng)用于很多領(lǐng)域之中。
　　本文以轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲水稻和轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米MON810為研究材料,分

3、別從定性和定量PCR檢測兩個方面建立了有效的轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)體系。論文工作取得的主要研究結(jié)果如下:
　　1、以轉(zhuǎn)Bt基因“克螟稻”為材料,利用普通CTAB法和DNA提取試劑盒分別對其提取DNA,比較顯示:試劑盒法明顯優(yōu)于普通CTAB法,能滿足熒光定量PCR檢測對模板DNA的要求。
　　2、在定性檢測的基礎(chǔ)上,用Taqman探針法對轉(zhuǎn)Bt基因水稻的NOS和Bt外源基因進(jìn)行了熒光定量檢測分析,并成功地對自配已知濃度的轉(zhuǎn)基因水稻進(jìn)行

4、了定量檢測,檢測值與實(shí)際值較為接近,檢測下限為0.05％,表明該體系具有較高的準(zhǔn)確度和靈敏度。
　　3、針對轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米MON810的轉(zhuǎn)化事件序列設(shè)計(jì)特異探針和引物,通過優(yōu)化實(shí)驗(yàn)對其熒光定量檢測體系進(jìn)行分析,建立了玉米MON810的最佳檢測體系。
　　4、利用上述特異探針和引物,對MON810和其它轉(zhuǎn)基因玉米品系T25、Bt11、Bt176同時進(jìn)行定量分析,結(jié)果顯示:只有MON810有熒光信號,說明該體系具有很好的品系特異