類缺血再灌注對胚胎小鼠紋狀體區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞活性、胞內(nèi)鈣離子濃度以及增殖能力的影響.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)利用倒置顯微鏡、共聚焦顯微鏡等實(shí)驗(yàn)儀器，采用免疫熒光法、免疫雙標(biāo)記檢測技術(shù)、MTT比色檢測技術(shù)，借助類缺血再灌注模型，從胚胎小鼠、成年小鼠和新生小鼠紋狀體區(qū)分離培養(yǎng)、鑒定神經(jīng)干細(xì)胞(neuralstemcells，NSCs)；并比較胚胎小鼠、新生小鼠以及成年小鼠的紋狀體區(qū)NSCs在體外的增殖及分化情況；觀察體外類缺血再灌注對培養(yǎng)的NSCs細(xì)胞活性和胞內(nèi)Ca2+濃度的影響，試圖對于缺血缺氧對NSCs的損傷機(jī)制進(jìn)行初步探索，并對類缺血

2、再灌注后神經(jīng)干細(xì)胞增殖情況進(jìn)行初步觀察。實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果如下：　　1)通過原代培養(yǎng)可在無血清培養(yǎng)條件下獲得懸浮生長的神經(jīng)球，呈nestin染色陽性，神經(jīng)球在血清誘導(dǎo)下貼壁后游出β-tubulin-Ⅲ、GFAP和Galc染色陽性細(xì)胞。 2)胚胎小鼠紋狀體區(qū)NSCs增殖速度較新生鼠和成年鼠紋狀體區(qū)NSCs快，與成年鼠的NSCs相比有顯著性差異；三種來源的NSCs均可分化產(chǎn)生神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞，其中神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞的

3、比例在三者間無顯著性差異。 3)類缺血再灌注后，類缺血再灌注組和氟桂利嗪預(yù)處理組胞內(nèi)游離Ca2+濃度均逐漸升高，再灌注2h達(dá)到高峰，3h時(shí)已開始降低；在相同時(shí)間點(diǎn)氟桂利嗪預(yù)處理組胞內(nèi)Ca2+濃度均低于類缺血再灌注組，其中0、30min、1h時(shí)有顯著性差異P＜0.05。 4)類缺血再灌注后，類缺血再灌注組和氟桂利嗪預(yù)處理組細(xì)胞活性降低，在相同時(shí)間點(diǎn)氟桂利嗪預(yù)處理組細(xì)胞活性均高于類缺血再灌注組，其中0、30min、1、2h時(shí)

4、差異顯著P＜0.05。 5)再灌注6-48h類缺血再灌注組和氟桂利嗪預(yù)處理組的細(xì)胞吸光度A值逐漸升高，變化趨勢較對照組明顯P＜0.01，類缺血再灌注組和氟桂利嗪預(yù)處理組間無顯著性差異。 試驗(yàn)結(jié)論如下： 1)培養(yǎng)獲得的神經(jīng)球在體外增殖迅速，nestin染色陽性，可在血清誘導(dǎo)下分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)和少突膠質(zhì)細(xì)胞，符合神經(jīng)干細(xì)胞的基本生物學(xué)特征，在本實(shí)驗(yàn)中成功地建立了小鼠紋狀體區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)技術(shù)。 2