殼寡糖硬脂酸嫁接物納米材料的免疫毒性研究.pdf

1、背景和目的：
　　殼寡糖硬脂酸嫁接物納米材料(stearic acid grafted chitosan oligosaccharidenanomicelles，CSO-SA)是由浙江大學(xué)藥學(xué)院藥物制劑研究所研制合成。CSO-SA是利用殼聚糖(CSO)分子結(jié)構(gòu)中的氨基與硬脂酸(SA)上的羧基經(jīng)過偶聯(lián)反應(yīng)，形成兩親性的聚合物膠團(tuán)。CSO-SA具有高生物相容性、可體內(nèi)降解、靶向性佳、緩釋可控等符合新型藥物載體需要的特性，因此有望用于包

2、載生物大分子，作為藥物載體材料。
　　我們課題組前期研究結(jié)果表明CSO-SA存在一定程度的肺部毒性、遺傳毒性等。免疫毒性作為敏感的毒性指標(biāo)，是藥物非臨床安全性評價的一項重要內(nèi)容。本實驗將根據(jù)美國國家毒理學(xué)項目(National Toxicology Program，NTP)推薦的小鼠免疫毒性檢測方案(USNTP,1988)，從免疫病理、體液免疫、細(xì)胞免疫、非特異性免疫四個方面初步評價CSO-SA對小鼠的免疫毒性。
　　方法：

3、
　　實驗用30只C57雄性小鼠，每組6只，分為CSO-SA(0、3.6、9、18 mg/kg)劑量組和環(huán)磷酰胺(CTX)陽性對照組。連續(xù)腹腔注射處理28天后，股動脈放血處死小鼠。分析小鼠體重增量和免疫器官的臟器指數(shù);檢測血常規(guī)、外周血中T淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞比例;血清中免疫球蛋白IgA、IgM、IgG水平;用MTT法測定NK細(xì)胞活性;HE染色后經(jīng)光鏡觀察組織病理學(xué)改變，透射電鏡(TEM)觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。

4、r>　　結(jié)果：
　　1.一般情況觀察
　　CSO-SA處理后，日常觀察發(fā)現(xiàn)小鼠活動度下降，消瘦等表現(xiàn)，高劑量(18mg/kg)組表現(xiàn)尤其明顯。
　　2.體重增量與臟器系數(shù)變化結(jié)果
　　CSO-SA反復(fù)處理可抑制小鼠生長，9、18 mg/kg組的小鼠體重增長比陰性對照組顯著降低(P＜0.05)。9、18mg/kg組小鼠脾臟臟器系數(shù)顯著高于陰性對照組(P＜0.05)。9 mg/kg組的小鼠胸腺臟器系數(shù)顯著高于陰性對照

5、組(P＜0.05)。
　　3.免疫器官組織病理學(xué)
　　HE染色觀察發(fā)現(xiàn)CSO-SA反復(fù)處理后脾小體結(jié)構(gòu)紊亂，白髓萎縮，紅髓擴(kuò)張;胸腺皮質(zhì)區(qū)變薄，髓質(zhì)區(qū)擴(kuò)增，皮髓質(zhì)接合處分界不清。電鏡觀察脾臟和胸腺的超微結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，淋巴細(xì)胞線粒體變得腫脹，還伴有空泡化現(xiàn)象。
　　4.血常規(guī)分析
　　血常規(guī)結(jié)果顯示CSO-SA反復(fù)染毒處理后，陽性對照組各指標(biāo)與陰性對照組相比均存在顯著性差異（P＜0.05）。9、18 mg/kg組中性粒

6、細(xì)胞百分比(NE％)與陰性對照組相比顯著升高（P＜0.05）。9、18 mg/kg組淋巴細(xì)胞百分比(LY％)與陰性對照組相比顯著降低(P＜0.05)。18 mg/kg組紅細(xì)胞計數(shù)(RBC)和血紅蛋白含量(HGB)與陰性對照組相比顯著下降（P＜0.05）。
　　5.小鼠外周血中T淋巴細(xì)胞亞型分析
　　CSO-SA反復(fù)染毒處理后，各劑量組CD4+T細(xì)胞相對百分比，CD8+T細(xì)胞相對百分比與生理鹽水陰性對照組相比，未觀察到顯著性差

7、異(P＞0.05)。
　　6.血清免疫球蛋白IgA、IgM、IgG水平
　　CSO-SA反復(fù)染毒處理后，3.6 mg/kg組小鼠IgM水平與陰性對照組相比顯著升高(P＜0.05)。
　　7.NK細(xì)胞活性檢測結(jié)果
　　CSO-SA反復(fù)染毒處理后，18 mg/kg組NK細(xì)胞活性與陰性對照組相比顯著降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　本實驗條件下，反復(fù)腹腔注射不同濃度(3.6、9、18 mg/kg) C