Ⅱ型極低密度脂蛋白受體促腫瘤細胞侵襲遷移的作用及其機制研究.pdf

1、極低密度脂蛋白受體(very low density lipoprotein receptor,VLDLR)屬于LDLR超家族成員,是1993年Sakai研究小組在構(gòu)建LDLR cDNA文庫時發(fā)現(xiàn)的。該基因結(jié)構(gòu)與LDLR家族其他成員非常相似,位于第9號染色體,包含19個外顯子。成熟的VLDLR由846個氨基酸殘基組成,總分子量約為135KD。由于第16號外顯子選擇性剪切的作用,全長的VLDLR中O-連接糖鏈域缺失產(chǎn)生了II型VLDLR。

2、較早的研究認為VLDLR主要通過參與介導(dǎo)甘油三酯的攝取而在脂代謝過程中發(fā)揮一定作用。
　　本研究的新穎之處在于揭示了II型VLDLR在腫瘤組織中高表達,且與淋巴結(jié)、遠端轉(zhuǎn)移,病理TNM分期等臨床指標明顯相關(guān)。此外,闡釋了II型VLDLR與腫瘤細胞侵襲、遷移能力存在密切聯(lián)系,該效應(yīng)的發(fā)揮涉及Wnt/β-Catenin信號通路。此項研究擴展了脂蛋白受體家族成員作為“瑞士軍刀”樣受體功能的多樣性,也將進一步深化對II型VLDLR與腫瘤發(fā)

3、生發(fā)展相互關(guān)系的認識,為在腫瘤細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)這一關(guān)鍵性腫瘤研究領(lǐng)域開拓新的方向。
　　第一部分II型VLDLR在多種惡性腫瘤中的表達變化及其與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系
　　摘要
　　目的：探討II型VLDLR在腫瘤組織中的表達變化與臨床病理各項指標的相關(guān)性,旨在初步闡釋II型VLDLR與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,為深入研究其影響腫瘤細胞生物學行為改變的潛在機制提供線索和依據(jù)。
　　方法：基于前期收集建立的臨床腫瘤標本,運用免疫組化

4、及蛋白免疫印跡技術(shù)檢測II型VLDLR蛋白在乳腺癌、胃癌和肺癌患者術(shù)后腫瘤組織及癌旁正常組織的表達水平,并結(jié)合病歷資料統(tǒng)計分析II型VLDLR在腫瘤組織中的表達變化與臨床病理各項指標的聯(lián)系。同時在上述標本中檢測分析Wnt/β-Catenin信號通路中關(guān)鍵蛋白β-Catenin與II型VLDLR的表達量是否具有相關(guān)性。
　　結(jié)果：1、相對于正常組織,II型VLDLR在乳腺癌、胃癌及肺癌組織中的表達均升高;2、高表達II型VLDLR與

5、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠端轉(zhuǎn)移以及TNM分期相關(guān),即在發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者腫瘤組織中II型VLDLR表達更高,提示II型VLDLR與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移存在潛在聯(lián)系;3、II型VLDLR在乳腺癌、胃癌組織中與β-Catenin及VEFG的表達呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：II型VLDLR在腫瘤組織中的表達明顯上調(diào),其發(fā)揮促腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用與上調(diào)表達或累積胞內(nèi)的β-Catenin密切相關(guān)。
　　第二部分II型VLDLR促腫瘤細胞侵襲遷移的作用及其機制探討

6、
　　摘要
　　目的：前面的研究表明,II型VLDLR與惡性腫瘤淋巴結(jié)及遠端轉(zhuǎn)移的關(guān)系密切,基于我們的發(fā)現(xiàn)和以往對Wnt/β-Catenin信號通路與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究,認為II型VLDLR與β-Catenin在胞漿內(nèi)的積累進而調(diào)控下游靶基因轉(zhuǎn)錄可能有關(guān)系。本研究檢測了II型VLDLR對人乳腺癌細胞系MCF-7及1590胞漿內(nèi)β-Catenin在mRNA和蛋白水平表達及對Wnt信號通路活化的影響。探討了II型VLDLR影

7、響腫瘤細胞侵襲、遷移可能的分子機制。
　　方法：1、Transwell體外侵襲實驗檢測II型VLDLR對MCF-7及1590細胞侵襲能力的影響;2、劃痕實驗檢測II型VLDLR對MCF-7及1590細胞遷移能力的影響;3、MTT檢測II型VLDLR對MCF-7及1590細胞增殖能力的影響;4、Realtime-PCR檢測II型VLDLR對β-Catenin mRNA表達的影響;5、Western blot檢測II型VLDLR對β-

8、Catenin表達、降解以及β-Catenin磷酸化的影響;6、報告基因檢測II型VLDLR對Wnt/β-Catenin活化程度的影響。
　　結(jié)果：1、相對于侵襲遷移能力較弱MCF-7細胞,高侵襲性高轉(zhuǎn)移性的1590細胞系中II型VLDLR表達明顯升高;2、在上述細胞中過表達II型VLDLR后,兩種細胞系的侵襲、遷移及增殖能力均有提高;3、過表達II型VLDLR對β-Catenin mRNA表達無明顯影響;4、II型VLDLR上調(diào)

9、胞漿內(nèi)β-Catenin的表達,抑制了β-Catenin的磷酸化,增強了β-Catenin的穩(wěn)定性;5、II型VLDLR具有放大Wnt3a對Wnt/β-Catenin激活效應(yīng)的作用;6、抑制Wnt/β-Catenin信號通路能有效抑制過表達II型VLDLR對腫瘤細胞侵襲、遷移能力的影響。
　　結(jié)論II型VLDLR受體通過增強了胞漿內(nèi)β-Catenin的穩(wěn)定性,增強了Wnt/β-Catenin信號通路活化的程度從而促進了腫瘤細胞的侵