少陽生骨方對SD大鼠軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)增殖及II型膠原表達(dá)影響的研究.pdf

1、 目的：通過對比觀察少陽生骨方及鹽酸氨基葡萄糖膠囊含藥血清對大鼠體外關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖、II型膠原蛋白達(dá)的影響,探討少陽生骨方保護(hù)損傷關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的效應(yīng)。方法：1.大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的建立與鑒定：原代細(xì)胞應(yīng)用聯(lián)合酶消化法從1周齡SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨獲取,并以倒置顯微鏡下觀察形態(tài)學(xué)表現(xiàn)及甲苯胺藍(lán)染色進(jìn)行鑒定；2. MTT比色法觀察少陽生骨方及鹽酸氨基葡萄糖膠囊含藥血清對大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞在體外培養(yǎng)增殖的影響；3.免疫組化法觀察少陽生骨

2、方及鹽酸氨基葡萄膠囊含藥血清對大鼠體外關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞II型膠原表達(dá)的影響。結(jié)果：1.采用聯(lián)合酶消化方法建立大鼠軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)體系,經(jīng)倒置顯微鏡下形態(tài)學(xué)觀察及甲苯胺藍(lán)染色鑒定,確認(rèn)分離培養(yǎng)的細(xì)胞符合軟骨細(xì)胞的生物學(xué)特征、形態(tài)學(xué)、組織化學(xué)染色顯示軟骨細(xì)胞培養(yǎng)傳3代以內(nèi)可以保持表型的穩(wěn)定。2.對軟骨細(xì)胞增殖的觀察顯示：少陽生骨方(SYSGF)5%、10%、20%含藥濃度的血清均能促進(jìn)體外正常軟骨細(xì)胞增殖,但增殖的效應(yīng)不隨濃度的遞增而增加,以1

3、0%的含藥血清濃度促進(jìn)正常培養(yǎng)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖最為明顯,且在48時促進(jìn)增殖作用最佳。在第48h時,對于正常培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞,10%SYSGF含藥血清組與10%空白血清組比較有顯著差異(P<0.05),與10%鹽酸氨基葡萄糖膠囊含藥血清組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),其增殖作用不及氨基葡萄糖膠囊；各組細(xì)胞的增殖效應(yīng)在第24h時較弱,第48時均強于第72h時。3.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：各組標(biāo)本均可見II型膠原陽性表達(dá),表達(dá)部位為胞漿,可見