BMP-14與bFGF對大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞體外增殖作用的實驗研究.pdf

1、關(guān)節(jié)軟骨由于其缺乏自身血液循環(huán)系統(tǒng)，僅靠關(guān)節(jié)滑液提供大部分營養(yǎng)，因此一旦損傷則很難修復。在目前軟骨組織工程研究中，自體軟骨細胞作為種子細胞面臨的難題是：體外培養(yǎng)的軟骨細胞生長緩慢，極易發(fā)生去分化，以致難以獲得滿足組織工程軟骨構(gòu)建所需的數(shù)量足夠且保持其正常表型的軟骨種子細胞。因此如何在使用合適濃度的生長因子等細胞因子的聯(lián)合刺激下，通過適當延長軟骨細胞的體外傳代次數(shù)，有利于獲得既有足夠數(shù)量并保持良好表型的軟骨細胞，以使自體軟骨細胞作為軟骨組

2、織工程種子細胞成為目前研究的熱點。骨形態(tài)發(fā)生蛋白-14(Bone morphogenetic protein，BMP-14)是多功能生長因子，它是機體生長發(fā)育的重要調(diào)節(jié)因子，其在誘導軟骨形成，促進骨、軟骨、肌腱韌帶損傷修復方面均有重要作用。成纖維細胞生成因子(fibroblast growth factor，F(xiàn)GF)具有刺激軟骨細胞增殖分化，導致有絲分裂原形態(tài)形成的作用。它是目前已知最強的促細胞生長因子。 目的： 本實驗

3、研究BMP-14與bFGF單獨及聯(lián)合應用對體外培養(yǎng)大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞增殖作用的影響，為探討不同生長因子在軟骨細胞體外增殖作用中的最佳組合及最佳濃度提供實驗依據(jù)。 實驗方法 體外分離與培養(yǎng)Wistar大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞。取生長良好的第二代軟骨細胞作為實驗細胞分組后分布加入不同組合和濃度的生長因子。A組為空白對照組，各實驗組根據(jù)BMP-14和bFGF濃度不同分15小組，共16組。各組BMP-14濃度分別取0ng/ml、50ng/

4、ml、100ng/ml、200ng/ml和各組bFGF濃度分別取0ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml。加入生長因子后第0，2，4和6天各組細胞計數(shù)，比較BMP-14和bFGF的增殖作用。用免疫細胞化學染色檢測Ⅱ型膠原表達，并以圖像分析軟件進行半定量分析。用阿利新藍法測定蛋白多糖表達。 實驗結(jié)果 BMP-14單獨作用即不能促進體外軟骨細胞增殖，也不能促進軟骨細胞Ⅱ型膠原和蛋白多糖的表達；bFGF單獨