BMP-14與bFGF對(duì)大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞體外增殖作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、關(guān)節(jié)軟骨由于其缺乏自身血液循環(huán)系統(tǒng)，僅靠關(guān)節(jié)滑液提供大部分營(yíng)養(yǎng)，因此一旦損傷則很難修復(fù)。在目前軟骨組織工程研究中，自體軟骨細(xì)胞作為種子細(xì)胞面臨的難題是：體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，極易發(fā)生去分化，以致難以獲得滿(mǎn)足組織工程軟骨構(gòu)建所需的數(shù)量足夠且保持其正常表型的軟骨種子細(xì)胞。因此如何在使用合適濃度的生長(zhǎng)因子等細(xì)胞因子的聯(lián)合刺激下，通過(guò)適當(dāng)延長(zhǎng)軟骨細(xì)胞的體外傳代次數(shù)，有利于獲得既有足夠數(shù)量并保持良好表型的軟骨細(xì)胞，以使自體軟骨細(xì)胞作為軟骨組

2、織工程種子細(xì)胞成為目前研究的熱點(diǎn)。骨形態(tài)發(fā)生蛋白-14(Bone morphogenetic protein，BMP-14)是多功能生長(zhǎng)因子，它是機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育的重要調(diào)節(jié)因子，其在誘導(dǎo)軟骨形成，促進(jìn)骨、軟骨、肌腱韌帶損傷修復(fù)方面均有重要作用。成纖維細(xì)胞生成因子(fibroblast growth factor，F(xiàn)GF)具有刺激軟骨細(xì)胞增殖分化，導(dǎo)致有絲分裂原形態(tài)形成的作用。它是目前已知最強(qiáng)的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子。 目的： 本實(shí)驗(yàn)

3、研究BMP-14與bFGF單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)體外培養(yǎng)大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖作用的影響，為探討不同生長(zhǎng)因子在軟骨細(xì)胞體外增殖作用中的最佳組合及最佳濃度提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法 體外分離與培養(yǎng)Wistar大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞。取生長(zhǎng)良好的第二代軟骨細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分組后分布加入不同組合和濃度的生長(zhǎng)因子。A組為空白對(duì)照組，各實(shí)驗(yàn)組根據(jù)BMP-14和bFGF濃度不同分15小組，共16組。各組BMP-14濃度分別取0ng/ml、50ng/

4、ml、100ng/ml、200ng/ml和各組bFGF濃度分別取0ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml。加入生長(zhǎng)因子后第0，2，4和6天各組細(xì)胞計(jì)數(shù)，比較BMP-14和bFGF的增殖作用。用免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)Ⅱ型膠原表達(dá)，并以圖像分析軟件進(jìn)行半定量分析。用阿利新藍(lán)法測(cè)定蛋白多糖表達(dá)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 BMP-14單獨(dú)作用即不能促進(jìn)體外軟骨細(xì)胞增殖，也不能促進(jìn)軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原和蛋白多糖的表達(dá)；bFGF單獨(dú)