肺癌原代細(xì)胞培養(yǎng)及其呼吸氣體的研究.pdf

1、目的：探索肺癌原代細(xì)胞培養(yǎng)的方法，并檢測肺癌原代細(xì)胞代謝過程中產(chǎn)生的揮發(fā)性有機(jī)化合物(volatile organic compounds，VOCs)，篩選肺癌特征性的呼吸氣體標(biāo)記物，為呼吸氣體診斷肺癌提供細(xì)胞水平的依據(jù)。 方法：取邵逸夫醫(yī)院2008年6月至2008年12月因“肺部腫物”行肺葉切除術(shù)的手術(shù)標(biāo)本20例，每一例中取腫塊組織作為實(shí)驗(yàn)組，距離腫塊＞10cm的周邊肺葉組織作為正常對照組，分別進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)。當(dāng)培養(yǎng)瓶底見5

2、0％以上貼壁細(xì)胞生長后，利用固相微萃取——?dú)庀嗌V質(zhì)譜聯(lián)用(solid—phase microextraction and gas chromatography—massspectroscopy，SPME—GCMS)技術(shù)，檢測各個培養(yǎng)瓶頂空氣體中的VOCs。 結(jié)果：因“肺部腫物”行肺葉切除術(shù)的手術(shù)標(biāo)本共20例，其中鱗癌9例，腺癌7例(包括3例腺癌合并細(xì)支氣管肺泡癌)，鱗腺癌(或腺鱗癌)2例，肺部良性病變2例(1例為慢性化膿性炎伴

3、機(jī)化性肺炎，1例為支氣管囊腫伴真菌感染)。采用組織塊原代細(xì)胞培養(yǎng)方法，在組織塊入溫箱常規(guī)培養(yǎng)之前，事先翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶放置30分鐘，組織塊貼壁良好；組織塊經(jīng)剪切后直接接種培養(yǎng)，一般經(jīng)過24-48小時后即有貼壁細(xì)胞沿著組織塊邊緣生長，20例標(biāo)本平均培養(yǎng)天數(shù)為11.75天，腺癌平均培養(yǎng)天數(shù)為10.1天(71天/7例)，鱗癌平均培養(yǎng)天數(shù)為14.1天(127天/9例)，兩者有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。在質(zhì)譜圖上，出峰時間為17.78分鐘和18.75

4、分鐘的物質(zhì)在肺癌原代細(xì)胞培養(yǎng)液中的含量明顯高于空白培養(yǎng)液中的含量，且其含量在不同類型的肺癌中有差異，由腺癌、腺癌合并細(xì)支氣管肺泡癌、鱗癌依次遞增；出峰時間為18.75分鐘的物質(zhì)在鱗癌的原代細(xì)胞培養(yǎng)液中含量明顯較腺癌和腺癌合并細(xì)支氣管肺泡癌高。經(jīng)過質(zhì)譜庫相似度檢索得出，出峰時間為17.78分鐘和18.75分鐘的物質(zhì)分別為1—甲基—萘和正十五烷。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)采用組織塊剪切后直接行原代細(xì)胞接種培養(yǎng)的方法簡便易行，組織塊貼壁率高，細(xì)胞