青蒿素防治細菌膿毒癥的實驗研究.pdf

1、目的：膿毒癥是由嚴重細菌感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemicinflammatoryresponsesyndrome，SIRS)，是嚴重?zé)齻?chuàng)傷和感染的常見并發(fā)癥，進一步發(fā)展可導(dǎo)致膿毒癥性休克(septicshock)、多器官功能障礙綜合癥(multipleorgandysfuctionsyndrome，MODS)，病死率高達50％-60％，至今尚無有效的治療手段。革蘭陰性菌細胞外膜成分脂多糖/內(nèi)毒素(lipopolysac

2、charide/endotoxin)和存在于革蘭陰性、陽性細菌的基因組DNA被認為是導(dǎo)致細菌膿毒癥發(fā)生的主要致炎因子。有關(guān)細菌膿毒癥拮抗措施的研究較多，但均未取得突破性進展，因此尋找有效防治膿毒癥的藥物和方法具有重要意義。 在中國，青蒿提取物用來治療瘧疾相關(guān)發(fā)熱已有兩千多年的歷史。1972年我國科研人員最早從植物黃花蒿中分離得到其含倍半萜內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的活性單體青蒿素(artemisinin)，其衍生物包括二氫青蒿素、蒿甲醚、蒿乙醚及

3、青蒿琥酯。除傳統(tǒng)的抗惡性瘧作用外，青蒿類物質(zhì)還具有其它方面的作用，如抗腫瘤、抗血吸蟲及調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)等作用。本課題旨在明確青蒿素防治細菌膿毒癥的作用及機制，為青蒿素的老藥新用提供實驗依據(jù)。 方法：①體外培養(yǎng)小鼠RAW264.7細胞，觀察青蒿素對CpGDNA、LPS和熱滅活大腸桿菌誘導(dǎo)RAW264.7細胞釋放TNF-α和IL-6的抑制作用，并明確其量效和時效關(guān)系；②建立小鼠膿毒癥模型，觀察青蒿素對CpGDNA、LPS和熱滅活大腸桿菌

4、攻擊小鼠的保護作用；③流式細胞術(shù)觀察青蒿素對CpGDNA結(jié)合RAW264.7細胞表面及內(nèi)化的影響；④RT-PCR檢測青蒿素對CpGDNA、LPS和熱滅活大腸桿菌刺激RAW264.7細胞TLR9和TLR4mRNA表達的影響。⑤電泳遷移率改變分析(EMSA)方法觀察青蒿素對CpGDNA、LPS和熱滅活大腸桿菌誘導(dǎo)RAW264.7細胞NF-κB活化的抑制作用。 結(jié)果：①青蒿素顯著抑制CpGDNA、LPS、熱滅活大腸桿菌誘導(dǎo)的TNF-α

5、和IL-6釋放，并呈明顯的量效和時效關(guān)系；②50、100、200mg/kg青蒿素顯著降低CpGDNA、LPS、熱滅活大腸桿菌攻擊小鼠的死亡率，青蒿素聯(lián)合抗生素氨芐青霉素對活大腸桿菌攻擊的小鼠具有協(xié)同保護作用；③青蒿素對CpGDNA與RAW264.7細胞表面結(jié)合及內(nèi)化無明顯影響；④青蒿素對CpGDNA、LPS或熱滅活大腸桿菌誘導(dǎo)RAW264.7細胞TLR9和TLR4mRNA表達無影響。⑤青蒿素抑制CpGDNA、LPS或熱滅活大腸桿菌誘導(dǎo)的