青島地區(qū)貝類中諾瓦克樣病毒污染狀況調(diào)查與風(fēng)險評估初探.pdf

1、諾瓦克樣病毒(Norwalk-like viruses，NLVs)是非細(xì)菌性腸胃炎的主要病原體，通過食品和水源傳播可以引起全球范圍的流行。美國聯(lián)邦疾病控制中心的調(diào)查表明約有42％的腸胃炎暴發(fā)與諾瓦克樣病毒有關(guān)。而在由食物污染造成的病毒性胃腸炎流行中，90％的病原是該病毒。流行病學(xué)調(diào)查提示雙殼軟體動物是NLVs最主要的載體。作為沿海地區(qū)，青島市貝類的消費(fèi)量很大，而貝類產(chǎn)品中NLVs污染情況的調(diào)查卻未見報道。 NLVs難以增殖，變異

2、多，鑒別和檢測非常困難，傳統(tǒng)的免疫學(xué)及血清學(xué)檢測方法存在很大的局限性。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)以及序列特異性核酸體外擴(kuò)增(NASBA)等分子檢測技術(shù)在病毒等致病微生物的檢測中已顯示出越來越多的優(yōu)勢。本文利用反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)和NASBA法對青島地區(qū)主要海產(chǎn)貝類中NLVs進(jìn)行了檢測，優(yōu)化和比較了兩種方法，初步獲得了青島地區(qū)海產(chǎn)貝類中NLVs污染情況的基礎(chǔ)資料。 比較了酸吸附洗脫和堿洗脫兩種不同病毒粒子提取方法，酸吸附洗脫

3、法檢出靈敏度比堿洗脫法高1倍。優(yōu)化了病毒粒子RNA的提取方法，發(fā)現(xiàn)影響RNA回收率的關(guān)鍵因素是沉淀時間，確定病毒RNA的沉淀時間為>2h。摸索了NASBA法檢測牡蠣中NLVs的反應(yīng)條件，初步建立了牡蠣中NLVs NASBA檢測方法。但是，NASBA方法對陽性樣品的檢出率低于RT-PCR方法。 從2005年12月至2007年4月，從青島市內(nèi)三區(qū)(市南區(qū)、市北區(qū)、四方區(qū))主要水產(chǎn)品市場收集了牡蠣樣品208個、雜色蛤樣品169個、毛蚶

4、樣品169個、扇貝樣品100個，用RT-PCR方法進(jìn)行檢測。其中，雜色蛤和扇貝樣品中均未檢出NLVs，牡蠣和毛蚶陽性檢出率分別為10.1％和5.3％。冬季(12月至次年2月)是牡蠣中NLVs檢出頻率最高的季節(jié)，檢出率達(dá)到18.8％；秋季(9月至11月)其次，檢出率為12.5％；春季和夏季的檢出率相對較低，分別為4.2％和2.1％。毛蚶與牡蠣的情況相似，秋季和冬季NLVs污染較高，陽性檢出率均為7.7％，春季其次，檢出率為5.1％，夏季未

5、發(fā)現(xiàn)NLVs污染。對陽性牡蠣樣品不同部位的檢測發(fā)現(xiàn)，NLVs存在于牡蠣的內(nèi)臟團(tuán)中，而肌肉以及鰓等部位均未發(fā)現(xiàn)NLVs。在此次調(diào)查過程中還發(fā)現(xiàn)，從市北區(qū)采集的牡蠣樣品中NLVs陽性檢出率最高，達(dá)到14.1％，市南區(qū)其次，為10.2％，四方區(qū)最低，為3.8％。從市南區(qū)采集的毛蚶樣品中NLVs陽性檢出率最高，為7.6％，市北區(qū)其次，為6.1％，四方區(qū)未檢出NLVs陽性毛蚶樣品。陽性貝類樣品主要集中在團(tuán)島水產(chǎn)品市場和南山水產(chǎn)品市場。本論文在參考