二苯乙烯苷通過(guò)下調(diào)p38MAPK-p53通路保護(hù)MPP+誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的凋亡.pdf

1、【引言】：
　　帕金森?。≒arkinson’sdisease,PD）是一種常見(jiàn)的中老年神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，其主要病理變化是含色素的神經(jīng)元變性缺失，尤以以黑質(zhì)致密部多巴胺（Dopamine,DA）能神經(jīng)元選擇性變性缺失為主。雖然PD的病因仍不明確，但已發(fā)現(xiàn)一些與其發(fā)病相關(guān)的危險(xiǎn)因素，如遺傳，年齡及環(huán)境等。
　　1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahy-dr

2、opyridine,MPTP）是一種人工合成的神經(jīng)毒性物質(zhì)，能使動(dòng)物和人出現(xiàn)PD癥狀。MPTP通過(guò)其活性代謝產(chǎn)物MPP+（1-methyl-phenylpyridiniumcation）使黑質(zhì)紋狀體DA能神經(jīng)元受損傷。
　　二苯乙烯苷（2,3,5,4-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG）是中藥何首烏的有效成分之一。具有抗氧化，清除自由自，抑制單胺氧化酶活性以及改善記憶功能的作用。近

3、年來(lái)，TSG的神經(jīng)保護(hù)作用逐漸受到人們的關(guān)注。研究證實(shí)TSG可改善老年癡呆小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，具有神經(jīng)保護(hù)作用，但是TSG對(duì)MPP+誘導(dǎo)的DA能神經(jīng)元損傷是否具有保護(hù)作用，目前尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　本研究選擇具有DA能神經(jīng)元特性的PC12細(xì)胞建立體外模型，旨在觀察TSG對(duì)MPP+誘導(dǎo)的DA能神經(jīng)元損傷是否有保護(hù)作用，并對(duì)其作用機(jī)制做初步探討。
　　【目的】：
　　1.建立帕金森病模型，篩選出MPP+對(duì)PC12細(xì)胞損傷的有效

4、濃度和TSG對(duì)MPP+損傷PC12細(xì)胞的有效保護(hù)濃度；
　　2.觀察TSG對(duì)MPP+誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的影響；
　　3.研究TSG抑制MPP+誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的可能機(jī)制。
　　【方法】：
　　1.設(shè)立空白對(duì)照組，200，300，500，700，800，1000，1200，1500mol/LMPP+濃度組作用于PC12細(xì)胞24h；TSG保護(hù)作用：篩選實(shí)驗(yàn)處理濃度設(shè)立正常對(duì)照組、MPP+損傷組（500mol/L）

5、、不同濃度的TSG預(yù)處理組（1,5,10,50,100mol/L），用噻唑藍(lán)（MTT）比色法檢測(cè)，最終篩選出最佳TSG預(yù)處理組濃度（1,5,10mol/L）；
　　2.設(shè)立正常對(duì)照組、MPP+組、不同濃度TSG預(yù)處理組（1,5,10mol/L），用MTT比色試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活性；Hoechst33258染色觀察細(xì)胞及細(xì)胞核形態(tài)變化；流式細(xì)胞儀（FCM）檢測(cè)細(xì)胞凋亡比率；TUNEL染色觀察細(xì)胞DNA斷裂情況；
　　3.通過(guò)蛋白免疫

6、印跡觀察細(xì)胞中caspase-3、p38MAPK的表達(dá)。
　　【結(jié)果】：
　　1．MTT比色法檢測(cè)顯示，與對(duì)照組相比，500mol/L的MPP+處理24h后細(xì)胞活力為48.3±3.6％（P<0.001）。而TSG預(yù)處理24h后，再用MPP+(500mol/L)處理24h，與MPP+組48.3±3.6％相比，1，5，10mol/LTSG預(yù)處理組細(xì)胞活力分別上升為57.8±1.2％（P<0.05），74.3±2.7％（P<0.0

7、5），86.8±2.0％（P<0.05），但高濃度TSG（50，100mol/L）對(duì)細(xì)胞無(wú)保護(hù)作用；
　　2．Hoechst染色顯示，正常細(xì)胞核呈藍(lán)色，邊緣光滑完整，均勻淡染，MPP+處理組細(xì)胞染色質(zhì)固縮，細(xì)胞核呈致密濃染，顯示較強(qiáng)熒光，甚至可見(jiàn)細(xì)胞核裂解，出現(xiàn)致密的顆粒熒光。與MPP+組47.4±2.4％相比，TSG預(yù)處理后凋亡率分別降低為31.6±2.3％(P<0.05)，22.4±1.8％(P<0.05)和13.4±1.1％

8、(P<0.05)；FCM結(jié)果顯示，正常組，MPP+處理組，TSG（1，5，10mol/L）預(yù)處理組凋亡細(xì)胞率分別為1.5％，35.6％，27.2％，19.1％和13.3％；TUNEL染色顯示，與正常對(duì)照組4.0±0.6％相比，MPP+組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加到35.3±1.2％（P<0.01）,而TSG組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)則顯著降低,分別降為25.3±1.2％(P<0.01)，17.3±0.9％(P<0.01)和11.7±0.9％（