丙型肝炎患者血清抗NS3-NS5天然雙特異性抗體的鑒定及其產(chǎn)生機制的研究.pdf

1、天然的IgG抗體分子由2條相同的重鏈和2條相同的輕鏈組成，重鏈和輕鏈以及兩條重鏈之間通過二硫鍵連接，形成四肽鏈結構，呈“Y”型構象。一般認為，一個抗體分子含有2個完全一樣的抗原結合部位，在結構上和功能上都是對稱的，即一個抗體只識別一種抗原，抗體是單特異性的。
　　 近年來人們發(fā)現(xiàn)IgG4分子是一種擁有獨特結構的動態(tài)分子，能在體內通過“半分子交換”形成可同時結合2種抗原的天然雙特異性抗體，這挑戰(zhàn)了“一種抗體對應一種抗原”的范式。我

2、們經(jīng)獨立研究發(fā)現(xiàn)用特定程序免疫兔可以得到針對2種不同抗原的天然雙特異性抗體，并建立獲取天然雙抗的動物模型。而后，我們在類風濕性關節(jié)炎病人體內鑒定出抗IgG和CCP的天然雙特異性抗體。我們推測，脊椎動物的免疫系統(tǒng)在同時接受不相關抗原的長期刺激下（如自身免疫性疾病，慢性寄生蟲、細菌、病毒性感染，腫瘤生長及其他慢性過程），易于產(chǎn)生針對這些抗原的雙特異性抗體。丙型肝炎病毒感染是一種病毒不斷復制的持續(xù)性感染過程，研究發(fā)現(xiàn)慢性丙型肝炎病人體內長期存

3、在針對HCV病毒抗原(Core，NS3，NS4，NS5)的抗體，我們推測HCV病人血清中可能存在相關的雙特異性抗體。
　　 本研究的目的是在丙型肝炎患者體內鑒定出針對HCV編碼的不同病毒抗原的天然雙特異性抗體，探討這種雙特異性抗體和丙型肝炎疾病的關系。在此基礎之上純化該雙特異性抗體，鑒定其IgG亞型，并研究產(chǎn)生機制。首先，本研究建立抗HCV NS3/NS4、NS3/NS5、NS3/Core雙特異性抗體的雙抗原夾心一生物素鏈霉親和

4、素酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法，用該法檢測91份丙型肝炎陽性血清，初步檢測到抗NS3/NS5天然雙特異性抗體的存在。為確定更大樣本量中NS3/NS5雙特異性抗體的陽性分布，將雙特異性抗體陽性臨界值(cut-off)設定為100份健康對照的雙抗OD均值+8SD，即檢測OD值大于0.090判為陽性，統(tǒng)計得出354例丙型肝炎病人NS3/NS5雙特異性抗體的陽性率為41％(145/354)。我們對115份雙特異陽性血清的NS3/NS5天然

5、雙特異性抗體OD值與丙肝病毒的復制即RNA拷貝數(shù)的相關性進行統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)二者不存在相關性，Spearman相關系數(shù)r=-0.1210，p=0.1977。隨后，我們用競爭抑制實驗和交叉反應排除實驗證實NS3/NS5雙特異性抗體的特異性，并用高分辨率凝膠過濾層析排除觀察到的雙特異性是由NS3單特異抗體和NS5單特異抗體形成的多聚體造成的可能性。用免疫親和層析方法純化該雙特異抗體失敗，但是通過Protein G親和柱和免疫磁珠分離法鑒定NS