異位骨化形成過程動(dòng)態(tài)變化的蛋白質(zhì)組學(xué)前期研究.pdf

1、目的：比較兔股骨近端擴(kuò)髓手術(shù)后，覆蓋擴(kuò)髓口肌瓣組織內(nèi)注入骨髓組織和保持此類肌瓣血供兩種因素引起髖關(guān)節(jié)周圍異位骨化的作用。驗(yàn)證兩因素同時(shí)施加的手術(shù)建模方法，其誘導(dǎo)異位骨形成的過程是否具有更好的可重復(fù)性和穩(wěn)定性。 方法：選取40只4月齡健康成年雄性新西蘭大白兔，隨機(jī)分為4組，每組10只，分批手術(shù)。A組(單純擴(kuò)髓手術(shù)組)、B組(肌瓣創(chuàng)面覆蓋擴(kuò)髓口組)、C組(骨髓組織注入無血供肌肉創(chuàng)面覆蓋擴(kuò)髓口組)、D組(骨髓組織組注入肌瓣創(chuàng)面覆蓋擴(kuò)髓

2、口組)。比較4種不同建模手術(shù)方式造成的異位骨化的術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)的影像學(xué)、血清學(xué)變化以及異位骨組織形成過程的組織結(jié)構(gòu)變化，分別于術(shù)后4周、8周、12周，每組取6只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物攝X線骨盆正位片判斷Brooker分級，比較各組Brooker分級2級以上誘發(fā)率、分級結(jié)果總體分布、組間比較有無差異；每組取2只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取異位骨組織進(jìn)行脫鈣后HE染色組織學(xué)檢查和透射電鏡觀察；每組取6只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物檢測血清堿性磷酸酶活性，進(jìn)行動(dòng)態(tài)變化的統(tǒng)計(jì)描述。 結(jié)果

3、：(1)4組術(shù)后3個(gè)時(shí)間點(diǎn)X線Brooker分級2級以上總誘發(fā)率和分級水平，有隨時(shí)間延長而增加的趨勢。骨髓注入的實(shí)驗(yàn)組的Brooker分級2級以上誘發(fā)率在術(shù)后三個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，均強(qiáng)于未注入骨髓的實(shí)驗(yàn)組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。保持肌肉組織血供的實(shí)驗(yàn)組Brooker分級2級以上誘發(fā)率在術(shù)后三個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，均強(qiáng)于未保持肌肉組織血供的實(shí)驗(yàn)組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(2)4種手術(shù)建模方式引起的異位骨化嚴(yán)重程度在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)上X線Brooker分級結(jié)果的組間比較，聯(lián)合干

4、預(yù)組D組均高于實(shí)驗(yàn)對照組A組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(A組vs D組：術(shù)后4周P=0.006；術(shù)后8周P<0.001；術(shù)后12周P<0.001)。(3)組織學(xué)結(jié)果顯示，注入骨髓或保證血供的單一干預(yù)因素均能增加成骨早期異位骨化發(fā)生的嚴(yán)重程度水平，其中骨髓注入因素組異位骨化組織學(xué)過程連續(xù)性較保證血供因素組好。聯(lián)合干預(yù)組異位骨化發(fā)生的程度在術(shù)后三個(gè)時(shí)間點(diǎn)上均重于實(shí)驗(yàn)對照組，且骨化的組織學(xué)過程連續(xù)進(jìn)行，能夠發(fā)展為成熟異位骨組織。(4)動(dòng)態(tài)監(jiān)測血清堿性

5、磷酸酶水平的變化趨勢，聯(lián)合X線發(fā)現(xiàn)，有助于判斷異位骨組織成骨活動(dòng)是否持續(xù)。4組血清ALP水平均值在術(shù)后4周達(dá)到峰值，術(shù)后8周、12周逐漸下降。實(shí)驗(yàn)對照組A組下降最快，聯(lián)合干預(yù)組D組下降最慢，術(shù)后12周D組血清ALP水平仍高于其他三組，提示D組的異位成骨活動(dòng)在術(shù)后12周仍強(qiáng)于其他實(shí)驗(yàn)組。 結(jié)論：本研究改進(jìn)了兔雙髖創(chuàng)傷后異位骨化動(dòng)物模型，骨髓注入肌肉組織并保持良好肌肉血供兩因素聯(lián)合施加的手術(shù)方式，使得該模型在影像學(xué)、組織學(xué)、血清學(xué)三

6、方面的檢查結(jié)果更為穩(wěn)定，骨髓注入因素的促異位成骨作用強(qiáng)于保持良好血供因素，后者在異位成骨過程早期與前者有協(xié)同作用。該模型異位骨形成的機(jī)制與臨床常見機(jī)制相似，且手術(shù)操作容易實(shí)現(xiàn)，取材方便，使用臨床常用的驗(yàn)證指標(biāo)。 目的：通過優(yōu)化骨組織總蛋白提取的方法，減少蛋白質(zhì)的降解、丟失，保持總蛋白提取液中蛋白質(zhì)濃度，特別是小分子量蛋白質(zhì)，降低溶液中金屬離子的濃度，建立符合蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)要求的骨組織總蛋白提取技術(shù)方法。 方法：取成年新西

7、蘭大白兔股骨近端的正常骨組織及第一部分動(dòng)物模型中獲得的異位骨，通過對文獻(xiàn)報(bào)道的基本研磨提取+透析+丙酮沉淀法的改進(jìn)，對易提取部分的組織用傳統(tǒng)方法，不易提取部分的組織加入低溫脫鈣、超聲震蕩等步驟進(jìn)行再提取。對本實(shí)驗(yàn)采用的兩種實(shí)驗(yàn)方法，進(jìn)行Bradford法蛋白濃度測定、SDS-PAGE質(zhì)譜兼容銀染法進(jìn)行比較。 結(jié)果：優(yōu)化的提取方法減少提取液中蛋白質(zhì)的降解、丟失，加強(qiáng)對難溶組織中可溶性蛋白質(zhì)的提取，透析和丙酮沉淀降低了溶液中金屬離子