乳頭狀甲狀腺癌中炎性因子通過誘導FAT10過表達而導致染色體不穩(wěn)定的機制研究.pdf

1、目的
　　探討在乳頭狀甲狀腺癌標本中FAT10的表達情況。研究FAT10過表達對人乳頭狀甲狀腺癌細胞染色體穩(wěn)定性的影響及對其抗凋亡及集落形成能力的影響。觀察TNF-α和IFN-γ通過誘導人乳頭狀甲狀腺癌TPC-1細胞中FAT10的表達而導致染色體核型異常的現(xiàn)象。解析TNF-α/FAT10路徑調控甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展進程的分子機制，進一步尋找有效的治療靶標。
　　方法
　　應用免疫組化的方法檢測FAT10在乳頭狀甲狀腺癌和正

2、常甲狀腺組織標本中的表達情況。采用脂質體法用Lipofectamine2000轉染pcDNA3-FAT10質粒進TPC-1細胞，采用G418進行篩選，建立穩(wěn)定過表達FAT10的人乳頭狀甲狀腺癌細胞株。并采用電穿孔法將FAT10siRNA轉染人TPC-1細胞，F(xiàn)AT10干擾組及陰性對照組電穿孔轉染24小時后，給予50ng/ml的TNF-α和50U/ml的IFN-γ刺激8小時，用Westernblot檢測各組細胞中的FAT10表達水平。采用

3、冷片法滴片，Giemsa染液染色的方法進行染色體核型分析，分析FAT10過表達及TNF-α和IFN-γ誘導TPC-1細胞出現(xiàn)非整倍體的現(xiàn)象。應用AnnexinⅤ凋亡試劑盒檢測FAT10過表達對TPC-1抗凋亡能力的影響。通過集落形成實驗觀察其集落形成能力的變化。
　　結果
　　免疫組化結果顯示，乳頭狀甲狀腺癌組織中的FAT10高表達的陽性率高于正常甲狀腺組織。Westernblot結果顯示FAT10過表達組細胞FAT10蛋白

4、水平明顯高于空白對照組和陰性對照組，F(xiàn)AT10過表達的人乳頭狀甲狀腺癌細胞株組出現(xiàn)非整倍體形象，并且抗喜樹堿誘導凋亡的能力和集落形成能力顯著高于對照組。人乳頭狀甲狀腺癌TPC-1細胞經(jīng)TNF-α和IFN-γ誘導后與空白對照組和陰性對照組相比過表達FAT10，并有劑量依賴關系。FAT10siRNA干擾可以有效抑制TNF-α和IFN-γ誘導的人乳頭狀甲狀腺癌TPC-1細胞中FAT10的表達，并且通過抑制FAT10表達，可以有效抑制TNF-α