MicroRNA-200c轉(zhuǎn)染前后以外陰鱗癌A-431細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響.pdf

1、前言：
　　 外陰癌(VulvarCancer)好發(fā)于絕經(jīng)后婦女，其中以外陰鱗狀細(xì)胞癌(VulvarSquamousCellCarcinoma，VSCC)居多，約占80％-90％，常見(jiàn)于60歲以上婦女，5年存活率為58.9％-68.9％[1]。研究結(jié)果表明外陰鱗癌的發(fā)生主要與人類乳頭狀瘤病毒(HumanPapillomaVirus，HPV)的感染有關(guān)，并且外陰硬化性苔蘚、外陰不典型增生及P53的突變均與外陰癌的發(fā)生有關(guān)，另外，人

2、類免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyViruses，HIV)、單純皰疹病毒(HerpesSimplexVirus，HSV)Ⅱ也是外陰癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素[1]，但其確切的發(fā)病、侵襲與轉(zhuǎn)移機(jī)制尚不清楚。
　　 MicroRNA簡(jiǎn)稱miRNA，是一類長(zhǎng)約18-25nt的非編碼的內(nèi)源性單鏈RNA分子，廣泛存在各類真核生物細(xì)胞中，對(duì)多種生物學(xué)過(guò)程發(fā)揮重要調(diào)控作用。目前已發(fā)現(xiàn)人類miRNA有700多種，其中miR-155

3、、miRNA-200家族和miR-205均參與并調(diào)控上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-MesenchymalTransition，EMT)過(guò)程，從而進(jìn)一步影響腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。其中miRNA-200家族(包括miR-200a，miR-200b，miR-200c，miR-141，miR-429等5個(gè)主要成員)在腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮十分重要的作用，其主要是通過(guò)抑制轉(zhuǎn)錄因子E盒結(jié)合鋅指蛋白(ZincFingerE-box-b

4、indingHomeobox，ZEB1andZEB2)的表達(dá)水平使E-鈣黏蛋白(E-cadherin，E-cad)表達(dá)上調(diào)進(jìn)而抑制EMT過(guò)程[14-16]。目前已經(jīng)有很多學(xué)者認(rèn)為miR-200家族成員miR-200c(包括miR-200c1和miR-200c2)對(duì)抑制EMT過(guò)程的效果較顯著，可能成為抑制多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展、浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移的重要原因之一[2]。但這種調(diào)控腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制是否在所有的腫瘤細(xì)胞中都起作用尚不清楚。

5、>　　 本論文在國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究理論與實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取外陰鱗癌A-431細(xì)胞為研究對(duì)象，探討miR-200c表達(dá)量的改變是否也能影響目標(biāo)細(xì)胞的E-鈣黏蛋白表達(dá)情況，并對(duì)目標(biāo)細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移能力產(chǎn)生影響，并初步分析miR-200c影響外陰鱗癌細(xì)胞侵襲及遷移的可能機(jī)制。
　　 方法：
　　 用脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法將miR-200c轉(zhuǎn)染外陰鱗癌A-431細(xì)胞株，以轉(zhuǎn)染前后作為對(duì)照，通過(guò)Western方法檢測(cè)外陰鱗癌A-431

6、細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-200c前后E-cadherin蛋白的表達(dá)情況，運(yùn)用Real-timePCR方法對(duì)轉(zhuǎn)染后的miR-200c進(jìn)行定量分析，并采用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)A-431細(xì)胞侵襲能力；采用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力；再利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法將轉(zhuǎn)染前后的結(jié)果進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果
　　 1、Western結(jié)果提示外陰癌A-431細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-200c后，E-cad蛋白表達(dá)較actin蛋白明顯上調(diào)；

7、r>　　 2、Transwell侵襲及遷移實(shí)驗(yàn)顯示外陰癌A-431細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-200c后，其侵襲及遷移能力均明顯降低(P<0.01，P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、轉(zhuǎn)染miR-200c后，外陰鱗癌A-431細(xì)胞中的E-cadherin蛋白表達(dá)明顯改變，說(shuō)明miR-200c可以影響目標(biāo)細(xì)胞中E-cadherin蛋白表達(dá)使其上調(diào)；
　　 2、轉(zhuǎn)染miR-200c后，外陰鱗癌A-431細(xì)胞的侵襲及遷移能