MicroRNA-200c轉染前后以外陰鱗癌A-431細胞侵襲和遷移能力的影響.pdf

1、前言：
　　 外陰癌(VulvarCancer)好發(fā)于絕經后婦女，其中以外陰鱗狀細胞癌(VulvarSquamousCellCarcinoma，VSCC)居多，約占80％-90％，常見于60歲以上婦女，5年存活率為58.9％-68.9％[1]。研究結果表明外陰鱗癌的發(fā)生主要與人類乳頭狀瘤病毒(HumanPapillomaVirus，HPV)的感染有關，并且外陰硬化性苔蘚、外陰不典型增生及P53的突變均與外陰癌的發(fā)生有關，另外，人

2、類免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyViruses，HIV)、單純皰疹病毒(HerpesSimplexVirus，HSV)Ⅱ也是外陰癌發(fā)生的風險因素[1]，但其確切的發(fā)病、侵襲與轉移機制尚不清楚。
　　 MicroRNA簡稱miRNA，是一類長約18-25nt的非編碼的內源性單鏈RNA分子，廣泛存在各類真核生物細胞中，對多種生物學過程發(fā)揮重要調控作用。目前已發(fā)現(xiàn)人類miRNA有700多種，其中miR-155

3、、miRNA-200家族和miR-205均參與并調控上皮-間質轉化(Epithelial-MesenchymalTransition，EMT)過程，從而進一步影響腫瘤細胞的侵襲與轉移。其中miRNA-200家族(包括miR-200a，miR-200b，miR-200c，miR-141，miR-429等5個主要成員)在腫瘤細胞的侵襲和轉移過程中發(fā)揮十分重要的作用，其主要是通過抑制轉錄因子E盒結合鋅指蛋白(ZincFingerE-box-b

4、indingHomeobox，ZEB1andZEB2)的表達水平使E-鈣黏蛋白(E-cadherin，E-cad)表達上調進而抑制EMT過程[14-16]。目前已經有很多學者認為miR-200家族成員miR-200c(包括miR-200c1和miR-200c2)對抑制EMT過程的效果較顯著，可能成為抑制多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展、浸潤與轉移的重要原因之一[2]。但這種調控腫瘤細胞侵襲轉移的分子機制是否在所有的腫瘤細胞中都起作用尚不清楚。

5、>　　 本論文在國內外相關研究理論與實驗的基礎上，選取外陰鱗癌A-431細胞為研究對象，探討miR-200c表達量的改變是否也能影響目標細胞的E-鈣黏蛋白表達情況，并對目標細胞的侵襲與轉移能力產生影響，并初步分析miR-200c影響外陰鱗癌細胞侵襲及遷移的可能機制。
　　 方法：
　　 用脂質體介導的轉染方法將miR-200c轉染外陰鱗癌A-431細胞株，以轉染前后作為對照，通過Western方法檢測外陰鱗癌A-431

6、細胞轉染miR-200c前后E-cadherin蛋白的表達情況，運用Real-timePCR方法對轉染后的miR-200c進行定量分析，并采用Transwell侵襲實驗檢測A-431細胞侵襲能力；采用Transwell遷移實驗檢測細胞遷移能力；再利用統(tǒng)計學方法將轉染前后的結果進行分析。
　　 結果
　　 1、Western結果提示外陰癌A-431細胞轉染miR-200c后，E-cad蛋白表達較actin蛋白明顯上調；

7、r>　　 2、Transwell侵襲及遷移實驗顯示外陰癌A-431細胞轉染miR-200c后，其侵襲及遷移能力均明顯降低(P<0.01，P<0.05)。
　　 結論：
　　 1、轉染miR-200c后，外陰鱗癌A-431細胞中的E-cadherin蛋白表達明顯改變，說明miR-200c可以影響目標細胞中E-cadherin蛋白表達使其上調；
　　 2、轉染miR-200c后，外陰鱗癌A-431細胞的侵襲及遷移能