microRNA-200c對ZEB1表達影響及對腫瘤細胞侵襲遷移作用.pdf

1、MicroRNA(miRNA)是近年來新發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性非編碼小分子RNA,長約18.25 m,其序列在物種間具有高度保守性。miRNA通過與靶基因的3’非翻譯區(qū)(3’UTR)上的靶序列結(jié)合抑制靶mRNA的翻譯或降解靶mRNA,發(fā)揮其基因沉默效應。研究表明,miRNA參與了真核生物的生長、發(fā)育、組織分化、信號轉(zhuǎn)導、新陳代謝、疾病及死亡等生理病理過程。miRNA被證明在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中也發(fā)揮了重要作用,其作用的機制尚不明確。
　

2、　 轉(zhuǎn)錄因子ZEB1(zinc-finger E-box binding homeobox1),又稱為TCF8或δEF1,可以負調(diào)控多種基因的表達,如IL-2、p73、GATA-3、collagenⅠ/Ⅱ等。ZEBl還可通過抑制E-cadherin的表達促進腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。microRNA-200c,屬于microRNA-200家族成員,研究發(fā)現(xiàn)其與ZEB1與microRNA-200c之間可相互抑制,形成負反饋機制調(diào)節(jié)腫瘤細胞

3、的侵襲轉(zhuǎn)移能力。
　　 本研究為了驗證此負反饋調(diào)節(jié)機制是否也在胃癌及其他腫瘤細胞系中發(fā)揮作用,我們檢測了幾種腫瘤細胞系中ZEB1基因的表達水平與腫瘤細胞的侵襲遷移能力,分析ZEB1基因的表達水平與腫瘤細胞侵襲遷移能力的關系,并通過在胃癌SGC-7901細胞中轉(zhuǎn)染microRNA-200c觀察其對胃癌SGC-7901細胞生物學行為的影響,為抑制腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移提供新的思路與方法。本研究分兩部分:
　　 1、選取正常胃黏膜

4、GES-1細胞,胃癌BGC-823、SGC-7901細胞、宮頸癌HeLa細胞及肺癌A549細胞,Real-time PCR檢測各細胞系中ZEB1基因的表達量,Transwell法檢測各細胞系的遷移及侵襲能力,將ZEB1基因的表達量與各細胞系的遷移及侵襲數(shù)目做相關性分析,發(fā)現(xiàn)ZEB1與腫瘤細胞的遷移及侵襲數(shù)目呈正相關,表明ZEB1與腫瘤細胞的侵襲及遷移能力有相關性。
　　 2、利用脂質(zhì)體Lipofectamin2000將人工合成的

5、microRNA-200c轉(zhuǎn)染SGC-7901細胞,并設空白轉(zhuǎn)染組及無關序列轉(zhuǎn)染組,轉(zhuǎn)染24 h后Real-time PCR檢測各轉(zhuǎn)染組中ZEB1基因的表達量,Transwell小室法檢測各轉(zhuǎn)染組細胞遷移及侵襲能力的變化。結(jié)果表明轉(zhuǎn)染microRNA-200c能明顯抑制了SGC-7901細胞ZEB1基因的表達及細胞遷移和侵襲能力。
　　 以上研究結(jié)果表明,在GES-1、BGC-823、SGC7901、A549及HeLa細胞系中,