氯化鑭對(duì)腫瘤細(xì)胞生長及侵襲性的作用研究.pdf

1、目的： 惡性腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是腫瘤患者病程進(jìn)展、致殘和致死的主要原因。侵襲性是指腫瘤細(xì)胞侵入鄰近組織的能力，該過程是惡性腫瘤的主要特征，亦是其發(fā)生轉(zhuǎn)移的第一步。與腫瘤細(xì)胞侵襲性和發(fā)生轉(zhuǎn)移相關(guān)的機(jī)制極為復(fù)雜，目前人們已經(jīng)對(duì)該過程中的一些蛋白水解酶和原癌基因有了初步認(rèn)識(shí)，如與細(xì)胞微環(huán)境中細(xì)胞外基質(zhì)降解相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶-2以及與腫瘤侵襲性生長相關(guān)的原癌基因c-met。另一方面，開發(fā)具有抗癌作用的天然小分子無機(jī)化合物是目前抗腫瘤藥物

2、研發(fā)的一個(gè)熱點(diǎn)。本文旨于研究輕稀土化合物氯化鑭對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的作用，分別以與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白水解酶和原癌基因?yàn)榘悬c(diǎn)，進(jìn)一步闡明稀土對(duì)腫瘤細(xì)胞作用的作用機(jī)制，擴(kuò)大稀土化合物的應(yīng)用領(lǐng)域，為臨床抗腫瘤藥物的研發(fā)提供新方向。 方法： （1）采用MTT法觀察輕稀土化合物氯化鑭對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7及人纖維肉瘤細(xì)胞HT-1080的毒性作用。 （2）采用侵襲性試驗(yàn)探討氯化鑭對(duì)人纖維肉瘤細(xì)胞HT-1080侵襲

3、性的影響。 （3）通過明膠酶譜法和Western Blot測定低劑量氯化鑭（≤20μmol/L）對(duì)人纖維肉瘤細(xì)胞HT-1080細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-2表達(dá)和活性的影響。 （4）應(yīng)用RT-PCR法，分別調(diào)查低劑量氯化鑭對(duì)腫瘤細(xì)胞HT-1080細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-2轉(zhuǎn)錄的影響（≤20μmol/L）以及對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7原癌基因c-met轉(zhuǎn)錄的影響（≤100μmol/L）。 （5）構(gòu)建Luciferase基因報(bào)告系統(tǒng)

4、，應(yīng)用PCR技術(shù)合成MMP-2啟動(dòng)子區(qū)域的突變位點(diǎn)，探討輕稀土化合物對(duì)人纖維肉瘤細(xì)胞株HT-1080 MMP-2的作用機(jī)制。 結(jié)果： （1）細(xì)胞毒性試驗(yàn)表明，輕稀土化合物氯化鑭濃度低于50μmol/L時(shí)，氯化鑭無論對(duì)MCF-7細(xì)胞株還是HT-1080細(xì)胞株的生長均無抑制作用。隨著濃度增加，氯化鑭對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖出現(xiàn)抑制作用，且抑制作用隨濃度的增加而增強(qiáng)；但是當(dāng)氯化鑭濃度過大（>400μmol/L）時(shí)，氯化鑭對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖

5、的抑制作用不再出現(xiàn)濃度依賴性。此外，不同細(xì)胞對(duì)氯化鑭的敏感性不同，人纖維肉瘤細(xì)胞株HT-1080對(duì)氯化鑭的敏感性更高。 （2）通過侵襲性試驗(yàn)表明，在對(duì)腫瘤細(xì)胞生長無明顯作用的濃度范圍內(nèi)（<50μmol/L），氯化鑭對(duì)腫瘤細(xì)胞的侵襲性有抑制作用，且抑制作用隨氯化鑭濃度的增加而增強(qiáng)。 （3）通過明膠酶譜法和Western Blot試驗(yàn)證實(shí)，對(duì)腫瘤生長無抑制作用的濃度范圍（<50μmol/L）的氯化鑭可抑制pro-MMP-2的

6、活性及含量，但是其對(duì)活化形式的MMP-2無抑制作用。 （4）應(yīng)用RT-PCR法，進(jìn)一步觀察了低濃度氯化鑭對(duì)原癌基因c-met和蛋白水解酶MMP-2基因轉(zhuǎn)錄的作用。低濃度氯化鑭可以下調(diào)c-met以及MMP-2的基因轉(zhuǎn)錄，并且抑制作用隨氯化鑭濃度的增加而增強(qiáng)。 （5）通過Luciferase報(bào)告系統(tǒng)以及啟動(dòng)子突變的方法測定MMP-2的啟動(dòng)子活性，證實(shí)氯化鑭通過作用于人纖維肉瘤細(xì)胞HT-1080 MMP-2啟動(dòng)子區(qū)的CREB結(jié)

7、合位點(diǎn)，阻斷了PKA/CREB通路而抑制該細(xì)胞MMP-2mRNA的轉(zhuǎn)錄并降低MMP-2的分泌，從而降低了腫瘤細(xì)胞的侵襲性。 結(jié)論： 不同濃度的輕稀土化合物氯化鑭對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用不同，高濃度氯化鑭（>100μmol/L）可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，低濃度的氯化鑭（<50μmol/L）對(duì)腫瘤細(xì)胞的侵襲性有一定抑制的作用。同一濃度的氯化鑭對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的增殖作用不同。低濃度的氯化鑭通過抑制與腫瘤侵襲性相關(guān)的蛋白水解酶（MMP-2）的