酸性肽、大豆黃酮和C肽對腫瘤細胞及腫瘤干細胞生長的影響.pdf

1、背景和目的:
　　 腫瘤干細胞(cancer stem cells,CSCs)是指在腫瘤組織內(nèi)存在一類數(shù)量極少但具有自我更新能力及產(chǎn)生異質(zhì)性的細胞群體,并且這類細胞對現(xiàn)有的化療藥物不敏感。腫瘤干細胞具有干細胞的類似特性,這就決定著腫瘤的增殖和腫瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)。
　　 大量研究已證實CD133已經(jīng)作為腫瘤干細胞表面的分子標記物,并且普遍存在于多種腫瘤細胞系,CD133+腫瘤細胞與腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移、耐藥及復(fù)發(fā)有著密切的

2、關(guān)系。盡管CD133的生物學(xué)功能尚未完全清楚,但現(xiàn)階段已經(jīng)成為一個非常有價值的分選腫瘤干細胞的標志物。
　　 酸性肽(acidic peptide,AP)是本實驗室從動物大腦中分離出的一個小分子神經(jīng)肽。研究表明,酸性肽可抑制神經(jīng)元凋亡,并對阿爾茨海默病有良好的治療作用。
　　 大豆黃酮(soybean flavone)是本實驗室從大豆中提取獲得的具有熒光性的一種類黃酮化合物。已有研究顯示,大豆黃酮可以提高抗氧化酶的活性,

3、具有清楚自由基的功能,并且能夠抑制腫瘤生長。
　　 C肽是本實驗室從動物體中分離的另一種肽類化合物。
　　 本實驗初步研究了酸性肽,大豆黃酮和C肽對腫瘤細胞生長的影響作用,以及對腫瘤干細胞生長的影響作用。
　　 材料與方法:
　　 1.將環(huán)磷酰胺、酸性肽、大豆黃酮和C肽配制成1mg/ml的溶液,4℃保存。
　　 2.取對數(shù)生長期的肝癌SMMC7721、胃癌BGC823和乳腺癌MCF7細胞,加入上述

4、藥物到細胞中,達到100μg/ml,200μg/ml,300μg/ml,400μg/ml,500μg/ml濃度,在24小時、48小時、72小時之后用MTT方法進行細胞計數(shù)。所得數(shù)據(jù)用SPSS11.5軟件進行分析,并繪制生長曲線。
　　 3.依據(jù)生長曲線挑選出抑制腫瘤細胞生長的藥物濃度,對三種細胞在藥物中繼續(xù)培養(yǎng)24小時、48小時、72小時之后,收集細胞。用細胞與CD133蛋白熒光素一抗標記混合,37℃孵育反應(yīng)20分鐘,在525n

5、m波長下進行細胞流式儀檢測,并用Cellquest軟件處理。所得數(shù)據(jù)用SPSS11.5軟件進行分析,以a=0.05作為有顯著性水準。
　　 結(jié)果：
　　 1.酸性肽、大豆黃酮和C肽對于三種腫瘤細胞在不同的給藥時間內(nèi)均有抑制腫瘤細胞生長的作用,并且抑制強度隨濃度的增大而增強；但抑制強度與作用時間無線性關(guān)系。
　　 2.肝癌SMMC7721正常對照組中存在少量CD133細胞。環(huán)磷酰胺、酸性肽、大豆黃酮和C肽處理24h

6、后CD133細胞數(shù)目之間存在顯著差異性,且具有統(tǒng)計學(xué)意義。但是,在酸性肽、大豆黃酮和C肽處理的肝癌SMMC7721細胞中的CD133細胞數(shù)與環(huán)磷酰胺處理組無顯著差異,表明酸性肽、大豆黃酮和C肽與環(huán)磷酰胺存在相同的抑制CD133細胞的效果。給藥處理48h和72h后,肝癌SMMC7721細胞中均檢測不到CD133細胞。
　　 結(jié)論：
　　 1.酸性肽、大豆黃酮和C肽均有抑制腫瘤細胞生長的作用,且與濃度呈線性關(guān)系。