Myosin X在腫瘤侵襲性生長(zhǎng)中作用的研究.pdf

1、絲狀偽足是細(xì)胞前導(dǎo)緣形成的富含肌動(dòng)蛋白的指狀突起，在游走性細(xì)胞移動(dòng)中起主要作用。絲足延長(zhǎng)和數(shù)量的增多是細(xì)胞定向遷移能力增強(qiáng)的表現(xiàn)。非傳統(tǒng)肌球蛋白X(Myosin X，Myo X)是細(xì)胞內(nèi)重要的分子馬達(dá)，調(diào)節(jié)細(xì)胞絲足的形成，并維持其穩(wěn)定性。
　　實(shí)驗(yàn)室前期工作通過(guò)Real-time PCR和Western Blot分別從分子和蛋白水平檢測(cè)了Myo X在乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)。在轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)的MDA-MB-231細(xì)胞中Myo X高表達(dá);在

2、轉(zhuǎn)移能力弱的MCF-7細(xì)胞中低表達(dá)。提示Myo X可能與腫瘤的侵襲能力相關(guān)。采用FITC-明膠降解實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)Myo X在MDA-MB-231細(xì)胞降解的細(xì)胞外基質(zhì)處有分布，說(shuō)明Myo X可能通過(guò)形成偽足而參與細(xì)胞外基質(zhì)的降解。用慢病毒載體攜帶Myo X shRNA侵染MDA-MB-231，沉默內(nèi)源性MyoX的表達(dá)。Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，沉默了Myo X之后，細(xì)胞侵襲能力減弱。
　　本研究利用慢病毒侵染的MDA-MB-23

3、1細(xì)胞建立荷瘤鼠模型，進(jìn)一步探討Myo X對(duì)腫瘤侵襲性生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響將Scramble shRNA和Myo X shRNA細(xì)胞以1.5×106個(gè)/只分別接種到裸鼠乳腺脂肪墊(n=5)，細(xì)胞接種16天后，接種部位有結(jié)節(jié)狀突起，分別測(cè)量小鼠形成的腫瘤的長(zhǎng)徑(L)和短徑(W)并計(jì)算腫瘤體積，Scramble shRNA組形成的腫瘤體積為114.66±54.50mm3，Myo XshRNA組形成的腫瘤體積為73.25±38.84mm3。之后隔

4、天測(cè)量，4周后處死裸鼠，Scramble shRNA組形成的腫瘤體積為5492.47±1781.23mm3，Myo X shRNA組形成的腫瘤體積為1794.87±786.27mm3，經(jīng)One-way ANONA統(tǒng)計(jì)分析差異具有顯著性。將獲得的腫瘤石蠟切片行Ki-67免疫組化染色，結(jié)果表明Myo X shRNA組Ki-67表達(dá)明顯減低，與對(duì)照組相比具有顯著性差異。上述結(jié)果表明，沉默了Myo X后，腫瘤的侵襲性生長(zhǎng)受到了影響，這種影響可能