羅格列酮對(duì)胰島素抵抗大鼠血清visfatin、VCAM-1水平及內(nèi)臟脂肪組織visfatin mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察高脂飲食誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠血清visfatin與血管細(xì)胞間黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1）的變化，分析visfatin、VCAM-1及胰島素抵抗之間的關(guān)系。通過半定量RT-PCR方法檢測大鼠內(nèi)臟脂肪組織visfatin的表達(dá)，并探討羅格列酮對(duì)血清visfatin、VCAM-1水平及內(nèi)臟脂肪組織visfatin mRNA表達(dá)的影響，分析visfatin在胰島素抵抗和

2、糖尿病發(fā)生中的可能機(jī)制。
　　 方法：雄性Wistar大鼠50只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（normal control group，NC）20只，高脂飲食組（high-fat-fed group，HF）30只。正常對(duì)照組給予基礎(chǔ)飼料（熱量組成：碳水化合物占65.5％，脂肪占10.3％，蛋白質(zhì)占24.2％），總熱量為348 kcal/100g；高脂飲食組給予高脂飼料（熱量組成為脂肪59.8％，碳水化合物20.1％，蛋

3、白質(zhì)20.1％），總熱量為501 kcal/100g。2組每日等熱量投喂飼料，4周后每組各隨機(jī)抽取10只大鼠，禁食10小時(shí)過夜，內(nèi)眥靜脈取血，分離血清，測定高脂飲食4周大鼠的空腹胰島素，并行高胰島素-正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn)（hyperinsulinaemic -euglycaemic lamp），了解大鼠葡萄糖輸注率（glucose infusion rate，GIR）的變化，判斷胰島素抵抗造模是否成功，確認(rèn)造模成功后，高脂飲食組剩余20只大

4、鼠隨機(jī)分為高脂對(duì)照組（high fat control group，HC）、羅格列酮組（rosiglitazone group，RSG），每組1 O只，在原飼養(yǎng)條件不變的基礎(chǔ)上，開始藥物干預(yù)，RSG組給予馬來酸羅格列酮3 mg·kg-1-d-1灌胃，NC組和HC組給予等量生理鹽水灌胃，每日一次，每周稱體重一次，根據(jù)體重調(diào)整給藥量。繼續(xù)喂養(yǎng)8周。療程結(jié)束后內(nèi)眥靜脈取血，分離血清，測定各組大鼠血脂、空腹胰島素（fasting insulin

5、，F(xiàn)INS）、visfatin和VCAM-1、游離脂肪酸（free fatty acid，F(xiàn)FA）等指標(biāo)，并進(jìn)行相關(guān)性分析。其中血清visfatin 和VCAM-1采用酶聯(lián)免疫（ELISA）法測定，血清FFA用銅顯色法測定。并行高胰島素正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn)，了解各組大鼠GIR的變化，4周和12周鉗夾結(jié)束后放血處死老鼠，準(zhǔn)確稱量腎臟及附睪周圍脂肪重量，即為內(nèi)臟脂肪總重量。脂肪組織置于液氮中快速冷卻后，放在-70℃冰箱中保存?zhèn)溆?。采用半定量RT

6、-PCR方法檢測三組大鼠內(nèi)臟脂肪組織visfatin mRNA表達(dá)水平。所得數(shù)據(jù)經(jīng)過整理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)或方差分析，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.高脂飲食喂養(yǎng)4周大鼠體重較正常對(duì)照組有所增加，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）、FINS較正常對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；GIR較正常對(duì)照

7、組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　 2.高脂喂養(yǎng)12周大鼠甘油三酯（triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、FFA、FBG均不同程度升高，與正常對(duì)照組比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；FINS明顯升高，與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；GIR明顯下降，與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 3.高脂對(duì)照組大鼠體重較正常對(duì)

8、照組升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但內(nèi)臟脂肪總重量與正常對(duì)照組比較明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；高脂對(duì)照組血清visfatin、VCAM-1水平較正常對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01，P<0.05）。
　　 4.羅格列酮組與高脂對(duì)照組比較，血清TC、TG、FBG均不同程度降低，GIR明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；FFA、GIR明顯降低，與高脂對(duì)照組比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

9、　　 5.羅格列酮組與高脂對(duì)照組比較，血清VCAM-1水平下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；血清visfatin水平無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，內(nèi)臟脂肪組織總重量較高脂對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 6.羅格列酮組、高脂對(duì)照組與正常對(duì)照組比較，內(nèi)臟脂肪組織visfatin mRNA表達(dá)均增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），羅格列酮組與高脂對(duì)照組比較，內(nèi)臟脂肪組織visfatin mRNA表達(dá)無

10、明顯差異。
　　 7.相關(guān)分析顯示血清visfatin水平與VCAM-1、TG、TC水平及內(nèi)臟脂肪含量呈正相關(guān)（r=0.910，P<0.01；r=0.499，P<0.01；r=0.367，P<0.05：r=0.446，P<0.05）；以VCAM-1為因變量，以visfatin、TG、TC、FFA為自變量進(jìn)行多元逐步回歸分析顯示visfatin是VCAM-1的獨(dú)立相關(guān)因素。
　　 結(jié)論：
　　 1.高脂飲食大鼠FB

11、G、FINS升高，GIR降低，高脂飲食成功誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠模型。
　　 2.高脂飲食大鼠血清visfatin與VCAM-1水平均升高，內(nèi)臟脂肪組織visfatin mRNA表達(dá)增強(qiáng)，visfatin、VCAM-1在胰島素抵抗的發(fā)生中起了重要作用。
　　 3.羅格列酮可以降低高脂飲食大鼠FBG、FINS、TC、TG、FFA，增加GIR，改善胰島素敏感性。可降低血清VCAM-1水平，說明羅格列酮在改善血管內(nèi)皮功能方面起了重