Rho激酶抑制劑對壓力超負荷性大鼠心肌肥厚的影響.pdf

1、目的：探討Rho激酶（ROCK）抑制劑法舒地爾（Fas）對壓力超負荷性心肌肥厚（POH）的作用及其作用機制。
　　 方法：
　　 1.模型制備及給藥
　　 采用腹主動脈縮窄術(shù)制備大鼠POH模型。60只雄性Wistar大鼠，體重200～220 g，隨機分為5組：假手術(shù)組、POH模型組、Fas低劑量組（L-Fas，2 mg/kg/d）、Fas高劑量組（H-Fas，10 mg/kg/d）及陽性對照藥卡托普利組（Capt

2、opril），每組12只。除假手術(shù)組外，其余4組大鼠均行腎上方腹主動脈縮窄術(shù)制備POH模型。假手術(shù)組僅分離腹主動脈而不結(jié)扎。術(shù)后4 w成功建立POH模型并開始給藥，療程為4w。
　　 2.指標(biāo)檢測
　　 實驗過程中密切觀察動物的一般狀況。停藥24 h后，進行以下指標(biāo)的檢測：（1）每組隨機取6只大鼠進行血流動力學(xué)檢測；（2）將各組中剩余6只大鼠稱取體重（BW）后斷頭取血，檢測血清超氧化物歧化酶（SOD）和一氧化氮合酶（NO

3、S）的活性、血清丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）、血漿內(nèi)皮素（ET-1）的水平；（3）取血完畢，迅速取出心臟，清除血跡，濾紙吸干，稱取心臟重量（HW）和左心室重量（LVW），計算心臟重量指數(shù)（HWI）和左心室重量指數(shù)（LVWI）：（4）從已稱取LVW的左心室取部分心肌組織，4％多聚甲醛固定24h，梯度酒精脫水，石蠟包埋，連續(xù)切片，分別進行HW染色以觀察心肌的病理學(xué)改變并測量心肌細胞直徑（CMD）和Masson染色以觀察心肌間質(zhì)的膠原改

4、變并測定心肌膠原百分比（CVF）；（5）血流動力學(xué)檢測完畢，以4％多聚甲醛行心臟灌注固定，然后取部分左心室肌組織，采用免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠心肌組織中凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2、c-fos和c-myc的表達，并計算Bcl-2/Bax的比值；（6）迅速從已稱取LVW的左心室取部分心肌組織液氮凍存，采用半定量RT-PCR法檢測各組大鼠心肌組織中RhoA mRNA和ROCK mRNA的表達變化。
　　 結(jié)果：
　　 1

5、.大鼠一般狀態(tài)
　　 假手術(shù)組大鼠一般狀況良好，與術(shù)前未見明顯差別。而接受腹主動脈縮窄術(shù)的大鼠術(shù)后1 w與術(shù)前比較，一般狀況較差，精神萎靡，活動量減少，攝食及飲水量減少；1 w后至實驗結(jié)束，POH組大鼠一般狀況始終較差，而Fas治療組和陽性對照組大鼠的一般狀況較POH組有明顯改善。各組大鼠均未出現(xiàn)呼吸困難、水腫、尿少等心衰癥狀。藥物干預(yù)后未見動物死亡。
　　 2.血流動力學(xué)變化
　　 與假手術(shù)組比較，POH組的I

6、NSP和LVEDP明顯增加，而±dp/dtmax顯著下降。與POH組相比，L-Fas組、H-Fas組和陽性對照組的LVSP和LVEDP均顯著下降，而±dp/dtmax明顯升高。
　　 3.血液生化指標(biāo)的測定
　　 與假手術(shù)組比較，POH組的NO含量及NOS和SOD的活性顯著降低，而ET-1和MDA含量升高；與POH組比較，L-Fas組的NO含量升高，而ET-1含量下降，該組的NOS和SOD活性有所升高，MDA含量有所下降

7、，但均無統(tǒng)計學(xué)意義；H-Fas組和陽性對照組的NOS和SOD的活性顯著增強，NO含量顯著升高，而MDA和：ET-1含量明顯減少。
　　 4.心臟重量指數(shù)的測定
　　 與假手術(shù)組比較，POH組的HW、LVW、HWI和LVWI均顯著增大。與POH組比較，L-Fas組、H-Fas組和陽性對照組的HW有不同程度的降低；L-Fas組、H-Fas組及陽性對照組的LVW、HWI和LVWI均顯著減小。
　　 5.病理學(xué)檢測

8、>　　 HE染色顯示：假手術(shù)組大鼠的心肌結(jié)構(gòu)清晰，形態(tài)未見明顯異常；而POH組可見心肌細胞明顯肥大，細胞核亦明顯增大變圓，心肌細胞排列紊亂，肌絲紋理增粗；L-Fas組、H-Fas組和陽性對照組的心肌損害程度明顯輕于POH組。
　　 Masson染色顯示，與假手術(shù)組相比，POH組心肌間質(zhì)內(nèi)膠原含量顯著增加，纖維化明顯加重；而L-Fas組、H-Fas組和陽性對照組的心肌纖維化程度較POH組明顯改善。
　　 與假手術(shù)組比較，

9、POH大鼠的CMD和心肌CVF顯著升高。與POH組比較，L-Fas組、H-Fas組及陽性對照組的CMD不同程度地減?。籋-Fas組及陽性對照組的心肌CVF明顯下降。
　　 6.凋亡相關(guān)基因的表達
　　 與假手術(shù)組比較，POH組心肌組織中Bax、C-fos和c-myc的表達顯著增強，Bcl-2的表達明顯下降，Bcl-2/Bax的比值下降。與POH組比較，L-Fas組的c-fos的表達明顯下降，Bax和c-myc的表達均有所

10、下降，Bcl-2表達有所上調(diào)，但無統(tǒng)計學(xué)意義；H-Fas組和陽性對照組的Bax、c-fos和c-myc明顯下降，Bcl-2的表達水平顯著升高；經(jīng)Fas或卡托普利治療后，Bcl-2/Bax的比值顯著升高。
　　 7.RhoA mRNA和ROCK mRNA的表達
　　 與假手術(shù)組比較，POH組的RhoA mRNA和ROCK mRNA的表達明顯上調(diào)。與POH組比較，L-Fas組和H-Fas組的RhoA mRNA和ROCK mR

11、NA表達不同程度地下調(diào)；陽性對照組的RhoAmRNA和ROCK mRNA表達亦顯著下調(diào)。
　　 結(jié)論：
　　 RhoA/ROCK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在POH的發(fā)生與發(fā)展中起著重要作用。ROCK抑制劑Fas可以有效地抑制POH，保護POH大鼠的心功能，這種作用可能與以下因素有關(guān)：
　　 （1）增強NOS的活性，促進NO的生成，抑制潛在的心肌細胞生長因子和肥厚因子ET-1的生成，進而抑制心肌纖維化和心肌重構(gòu)；