Rho激酶抑制劑對大鼠壓力負(fù)荷性心力衰竭保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的:探討Rho激酶抑制劑是否對壓力負(fù)荷性心力衰竭大鼠具有保護(hù)作用，為有效治療壓力負(fù)荷性心力衰竭提供新的理論依據(jù)和思路。
　　方法:80只8周齡雄性SD大鼠分成假手術(shù)組、手術(shù)組;手術(shù)中依據(jù)干預(yù)方式將手術(shù)組平行分成三組:安慰劑組、依立盧2 mg/kg/d組（低劑量給藥組）和依立盧10 mg/kg/d組（高劑量給藥組），每組各20只。建立壓力負(fù)荷心力衰竭大鼠模型，然后分別給予以下處理假手術(shù)組:生理鹽水10 mg/kg腹腔注射，每日1次

2、;安慰劑組:生理鹽水10 mg/kg腹腔注射，每日1次;低劑量給藥組:依立盧2mg/kg腹腔注射，每日2次;高劑量給藥組:依立盧10mg/kg腹腔注射，每日2次，所有大鼠術(shù)后干預(yù)3周，飼養(yǎng)至第7周后，采用小動物高頻超聲檢測不同組大鼠心率，室間隔厚度(IVSD)，左室后壁舒張末期厚度(LVPWd)，和左室后壁收縮期末期厚度(LVPWs)。然后每組隨機(jī)選取6只，有創(chuàng)性測量左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓最大上升/

3、下降速率(±dp/dtmax)。對其余大鼠稱體重(BW)，麻醉后處死，暴露心臟，取部分大鼠心肌行HE和Masson染色。另取大鼠心肌組織，行Real-timePCR和Westem blot檢測，檢查黑色素瘤分化相關(guān)基因5(MDA5)、肌醇依賴酶1(IRE1α)、超氧化物歧化酶-1(SOD-1)、核轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子-2(Nrf2)、Kelch樣ECH相關(guān)蛋白-1(Keap1)mRNA水平和蛋白質(zhì)表達(dá)水平。再用ELISA法檢測血清MDA5、IR

4、E1α、SOD-1、Nrf2和keap1蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:建立壓力負(fù)荷心力衰竭大鼠模型后，予依立盧處理后2組高頻超聲測定左心室IVSD、LVPWd、LVPWs明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，與低劑量給藥組相比，高劑量給藥組IVSD、LVPWd、LVPWs下降更低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。建模后各組大鼠左室壓力波動明顯增大，心率加快，LVSP、±dp/dtmax絕對值明顯降低，LVDEP明顯升高，差異具

5、有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，說明慢性心衰模型建立成功。依立盧干預(yù)后LVSP、±dp/dtmax絕對值明顯上升，LVDEP明顯下降（*P＜0.05），且高劑量組變化更為明顯(＃P＜0.05)。且依立盧處理后，大鼠心臟重量指數(shù)明顯下降（*P＜0.05），但低劑量與高劑量組間無明顯差異（P＞0.05）。光鏡下病理結(jié)果顯示安慰劑組心肌細(xì)胞破壞明顯，心肌纖維斷裂溶解，心肌橫紋消失，大量炎性細(xì)胞浸潤。依立盧給藥組橫紋肌破壞減少，炎性細(xì)胞浸潤及肉芽

6、組織少量生成，且高劑量給藥組橫紋肌破壞程度及肉芽組織生成少于低劑量給藥組。大鼠心肌氧化應(yīng)激指標(biāo)MDA5、IRE1α mRNA水平及心肌MDA5、IRE1α蛋白表達(dá)均明顯升高(P＜0.05)，抗氧化應(yīng)激指標(biāo)SOD-1mRNA水平及SOD-1蛋白表達(dá)量均明顯降低(P＜0.05)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;血清氧化應(yīng)激指標(biāo)MDA5、IRE1α蛋白水平明顯升高（P＜0.05），抗氧化應(yīng)激指標(biāo)SOD-1蛋白水平明顯降低(P＜0.05)。應(yīng)用依立盧處理后

7、，大鼠心肌MDA5、IRE1αmRNA水平及心肌MDA5、IRE1α蛋白表達(dá)量均明顯下降，心肌SOD-1 mRNA水平及心肌SOD-1蛋白表達(dá)量及其均明顯升高（*P＜0.05），血清MDA5、IRE1α蛋白水平均明顯下降（*P＜0.05），抗氧化應(yīng)激指標(biāo)SOD-1蛋白水平明顯升高（*P＜0.05）。且依立盧對MDA5、IRE1α、SOD-1的調(diào)節(jié)能力具有劑量依賴性（＃P＜0.05）。依立盧處理后，大鼠心肌和血清Nrf2、keap1 mR

8、NA水平及Nrf2、keap1蛋白表達(dá)量均明顯上調(diào)（*P＜0.05），且高劑量給藥組上調(diào)效果明顯高于低劑量給藥組（＃P＜0.05=。
　　結(jié)論:1.Rho激酶抑制劑（依立盧）能減輕壓力負(fù)荷性心力衰竭心肌損傷，降低炎性細(xì)胞浸潤及抑制肉芽組織生成。
　　2.Rho激酶抑制劑（依立盧）通過降低促氧化應(yīng)激MDA5和IRE1α蛋白表達(dá)，提高抗氧化應(yīng)激SOD-1蛋白表達(dá)，抑制了壓力負(fù)荷性大鼠心肌重構(gòu)。
　　3.Rho激酶抑制劑（依