Rho激酶抑制劑（Y27632）對房水流暢率的作用及其機制.pdf

1、本文論述了Rho激酶抑制劑（Y27632）對房水流暢率的作用及其機制，分以下幾部分展開： 第一部分： 目的：研究選擇性Rho激酶和細胞收縮抑制劑Y27632(簡稱：Y27)對牛眼房水流暢率、房水引流的流體模式和房水叢內(nèi)壁和鄰管組織(JCT)形態(tài)的作用及其機制。 方法：12只離體牛眼在15mmHg的壓力下，用5.5M葡萄糖磷酸緩沖液(GPBS)灌注，連續(xù)記錄房水流暢率。在達到穩(wěn)定的房水流暢率后，7只牛眼用50μM

2、Y27葡萄糖磷酸緩沖液做7ml前房內(nèi)容交換，并灌注0.5ml；另5只牛眼僅用GPBS交換前房內(nèi)容和灌注作為對照。然后12只牛眼再用直徑為0.5gm的熒光微球溶液(0.002％v/v)交換前房內(nèi)容，并灌注0.5ml，以標(biāo)記房水引流的流體模式。最后全部牛眼用Kamovsky固定液灌注固定。牛眼所有4個像限均在角鞏緣處做垂直和平行與角鞏緣的組織切片(1-1.5mm厚)，用共聚焦顯微鏡觀察，并沿房水叢的內(nèi)壁照相。根據(jù)共聚焦顯微鏡照片測量房水叢內(nèi)

3、壁的長度(TL)和熒光微球標(biāo)記的內(nèi)壁長度(L)(>16照片/眼)，并計算平均有效濾過長度百分比(PEFL=L/TL)。含有房水叢的標(biāo)本再經(jīng)進一步處理后，用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡檢查。在光學(xué)顯微鏡照片上(>16照片/眼)，測量房水叢內(nèi)壁總長(TL)和內(nèi)壁與JCT有分離的長度(SL)，計算平均分離長度百分比(PSL=SL/TL)。 結(jié)果：在使用Y27后，牛眼房水流暢率平均增加0.83+0.26 μl/min/mmHg(58.2±18

4、.9％)：而在對照眼其改變僅為0.04±0.14 μl/min/mmHg(6.04±9.3％)，這一差異在統(tǒng)計學(xué)上有顯著意義(P=0.03和0.04)。在對照眼，熒光微球在小梁網(wǎng)呈現(xiàn)節(jié)段性分布，沿房水叢內(nèi)壁斑點狀標(biāo)記，在集合管口有熒光微球的聚集。而使用Y27的牛眼則顯示較為均勻的熒光微球分布和沿內(nèi)壁更廣泛的熒光微球標(biāo)記。在使用Y27的牛眼，平均有效濾過長度百分比(PEFL)(57.6±6.6％)是對照眼(18.2±4.5％)的3倍(p=

5、0.001)。光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡檢查均顯示，與對照眼相比，使用Y27的牛眼有明顯的房水叢內(nèi)壁與JCT的膨脹，有顯著房水叢內(nèi)壁與JCT之間的分離，并向房水叢管腔內(nèi)隆起。在使用Y27的牛眼，平均分離長度百分比(PSL)(59.3±3.6％)是對照眼(20.8±2.0％)的2.8倍。(P<0.001) 結(jié)論：Y27可以明顯增加牛眼房水流暢率、沿房水叢內(nèi)壁的有效濾過長度百分比和分離長度百分比。Y27的作用可能是通過重新分布房水引流到

6、一個更廣泛的房水叢內(nèi)壁和JCT區(qū)域而發(fā)揮增加房水流暢率的作用。這一發(fā)現(xiàn)也支持我們的假設(shè)，即房水叢內(nèi)壁與其下JCT連接的完整性是調(diào)節(jié)房水外流阻力的重要因素。 第二部分： 目的：研究選擇性Rho激酶和細胞收縮抑制劑Y27632(Y27)對猴眼房水流暢率、房水引流的流體模式和Schlemm氏管內(nèi)壁和鄰管組織(JCT)形態(tài)的作用及其機制。 方法：8只離體猴眼在15mmHg的壓力下，用5.5M葡萄糖磷酸緩沖液(GPBS)灌

7、注，連續(xù)記錄房水流暢率。在達到穩(wěn)定的房水流暢率后，4只猴眼用50μM Y27葡萄糖磷酸緩沖液做5ml前房內(nèi)容交換，并灌注0.3ml；另4只猴眼僅用GPBS交換前房內(nèi)容和灌注作為對照。然后8只猴眼再用直徑為0.5gm的熒光微球溶液(0.002％v/v)交換前房內(nèi)容，并灌注0.3ml，以標(biāo)記房水引流的流體模式。最后全部猴眼用Karnovsky固定液灌注固定。猴眼所有4個像限均在角鞏緣處做垂直和平行與角鞏緣的組織切片(1-1.5mm厚)，用共

8、聚焦顯微鏡觀察，并沿Schlemm氏管的內(nèi)壁照相。根據(jù)共聚焦顯微鏡照片測量Schlemm氏管內(nèi)壁的長度(TL)和熒光微球標(biāo)記的內(nèi)壁長度(L)(>16照片/眼)，并計算平均有效濾過長度百分比(PEFL=L/TL)。含有Schlemm氏管的標(biāo)本再經(jīng)進一步處理后，用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡檢查。在光學(xué)顯微鏡照片上(>16照片/眼)，測量了Schlemm氏管內(nèi)壁總長(TL)和內(nèi)壁與JCT有分離的長度(SL)，計算平均分離長度百分比(PSL=SL/

9、TL)。 結(jié)果：在使用Y27后，猴眼房水流暢率平均增加0.59±0.11 μgl/min/mmHg(114.9±14.9％)；而在對照眼其改變僅為0.18±0.05 μl/min/mmHg(44.3±9.7％)，這一差異在統(tǒng)計學(xué)上有顯著意義(p=0.03和0.01)。在對照眼，熒光微球在小梁網(wǎng)呈現(xiàn)節(jié)段性分布，沿Schlemm氏管內(nèi)壁斑點狀標(biāo)記，在集合管口有熒光微球的聚集。而使用Y27的猴眼則顯示較為均勻的熒光微球分布和沿內(nèi)壁更廣

10、泛的熒光微球標(biāo)記。在使用Y27的猴眼，平均有效濾過長度百分比(PEFL)(82.54±1.2％)是對照眼(24.2±4.2％)的3.4倍(p<0.001)。光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡檢查均顯示，與對照眼相比，使用Y27的猴眼有明顯的Schlemm氏管內(nèi)壁與JCT的膨脹，有顯著Schlemm氏管內(nèi)壁與JCT之間的分離，并向Schlemm氏管管腔內(nèi)隆起。在使用Y27的猴眼，平均分離長度百分比(PSL)(75.24±4.0％)是對照眼(33.5±

11、5.3％)的2.2倍。(p=0.001) 結(jié)論：Y27可以明顯增加猴眼房水流暢率和沿Schlemm氏管內(nèi)壁的有效濾過長度百分比和分離長度百分比。Y27的作用可能是通過重新分布房水引流到一個更廣泛的Schlemm氏管內(nèi)壁和JCT區(qū)域而發(fā)揮增加房水流暢率的作用。這一發(fā)現(xiàn)也支持我們的假設(shè)，即Schlemm氏管內(nèi)壁與其下JCT連接的完整性是調(diào)節(jié)房水外流阻力的重要因素。 第三部分： 目的:研究選擇性Rho激酶和細胞收縮抑制

12、劑Y27632對人眼房水流暢率、房水引流的流體模式和Schlemm's管內(nèi)壁和鄰管組織(JCT)形態(tài)的作用及其機制. 方法:8只離體人眼在15mmHg的壓力下,用5.5M葡萄糖磷酸緩沖液(GPBS)灌注,連續(xù)記錄房水流暢率.在達到穩(wěn)定的房水流暢率后,4只人眼用50μM Y27葡萄糖磷酸緩沖液做5ml前房內(nèi)容交換,并灌注0.3ml;另4只人眼僅用GPBS交換前房內(nèi)容和灌注作為對照.然后8只人眼再用直徑為0.5gin的熒光微球溶液(

13、0.002％ v/v)交換前房內(nèi)容,并灌注0.3ml,以標(biāo)記房水引流的流體模式.最后全部人眼用Karnovsky固定液灌注固定.人眼所有4個像限均在角鞏緣處做垂直和平行與角鞏緣的組織切片(1-1.5mm厚),用共聚焦顯微鏡觀察,并沿Schlemm's管的內(nèi)壁照相.根據(jù)共聚焦顯微鏡照片測量Schlemm氏管內(nèi)壁的長度(TL)和熒光微球標(biāo)記的內(nèi)壁長度(L)(>16照片/眼)，并計算平均有效濾過長度百分比(PEFL=L/TL).含有Schle

14、mm's管的標(biāo)本再經(jīng)進一步處理后,用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡檢查. 結(jié)果:在使用Y27后,人眼房水流暢率平均增加0.02±0.01 μl/min/mmHg(8.1±3.0％);而在對照眼其改變也有0.02±0.03 μl/min/mmHg(11.3±13.4％),這一差異在統(tǒng)計學(xué)上無顯著差異(p=0.98和0.83).在對照眼,熒光微球在小梁網(wǎng)呈現(xiàn)節(jié)段性分布,沿Schlemm氏管內(nèi)壁斑點狀分布,在集合管口有熒光微球的聚集.而使用Y

15、27的人眼也顯示熒光微球在小梁網(wǎng)呈現(xiàn)節(jié)段性分布,沿Schlemm氏管內(nèi)壁斑點狀標(biāo)記,也在集合管口有熒光微球的聚集;在使用Y27的人眼,平均有效濾過長度百分比(PEFL)為47.44±6.5％,對照眼為39.04±12.5％,兩者無顯著性差異(p=0.41).光學(xué)顯微鏡檢查顯示,Y27用藥眼和對照眼,Schlemm氏管內(nèi)壁與JCT基質(zhì)緊密相貼,無Shlemm氏管內(nèi)壁與JCT之間的分離.電鏡下可見Schlemm氏管內(nèi)壁與其下的細胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)

16、對合,JCT組織較緊密,無內(nèi)壁與其下JCT的分離;細胞與細胞及細胞與基質(zhì)問的連接保持完整.在Schlemm氏管內(nèi)壁下、JCT組織和小梁組織中,可以看見大量縱向、垂直和斜行排列的彈性纖維. 結(jié)論:Y27不能增加人眼房水流暢率和沿Schlemm氏管內(nèi)壁的有效濾過長度,也不引起Schlemm氏管與JCT組織的分離.這可能與人眼JCT區(qū)域和小梁網(wǎng)中大量的彈性纖維網(wǎng)增強了Schlemm氏管內(nèi)壁與JCT的連接,而使其難以發(fā)生分離有關(guān).這一發(fā)