Rho-Rock信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在壓力超負(fù)荷性大鼠左室重構(gòu)中的作用及其抑制劑法舒地爾干預(yù)影響.pdf

1、目的: 1.觀察RhoA，Rho激酶1(Rock1)mRNA在壓力負(fù)荷性大鼠心肌中的表達(dá)情況，探討小G蛋白R(shí)ho/Rock信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與壓力負(fù)荷性大鼠左心室重構(gòu)的關(guān)系。 2.觀察Rho激酶抑制劑法舒地爾(fasudil)對(duì)心肌組織RhoA，RocklmRNA表達(dá)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β2及Ⅲ型膠原含量的干預(yù)作用，探討法舒地爾對(duì)壓力負(fù)荷性大鼠左心室重構(gòu)的影響及其可能機(jī)制。 方法: 1.32只SD大鼠隨機(jī)選取8只，

2、作為假手術(shù)組，將其余的24只大鼠進(jìn)行腹主動(dòng)脈縮窄手術(shù)，造模1周后將造模大鼠隨機(jī)分為2組，模型組和法舒地爾藥物干預(yù)組，每組各12只。法舒地爾組法舒地爾5mg/kg，腹腔注射，每天兩次，假手術(shù)組、模型組以等量生理鹽水腹腔注射。自腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)后1周起各組給藥，共4周。 2.觀察期間，法舒地爾組死亡1只。觀察期滿后，將動(dòng)物處死后，準(zhǔn)確秤取體重、全心濕重(HWW)、左心室游離壁濕重(LVFWW)，根據(jù)LVFWW、左室肥厚指數(shù)(LVHI)

3、、HWW作為判斷是否存在心肌肥厚的指標(biāo)。光鏡HE染色和免疫組化方法檢測(cè)Ⅲ型膠原觀察心肌細(xì)胞和間質(zhì)的變化，作為心肌重構(gòu)的形態(tài)學(xué)檢測(cè)指標(biāo)。處死前測(cè)量大鼠尾動(dòng)脈壓，左室舒張末壓(LVDEP)，左室收縮壓(LVSP)，評(píng)價(jià)左室功能。逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)RhoA，Rock1mRNA的表達(dá)，計(jì)算RhoA，Rock1mRNA與β-actin mRNA的灰度比值。免疫組化方法檢測(cè)心肌轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β2(TGF-β2)，計(jì)算平均光密

4、度(IOD)。 結(jié)果: 1.大鼠一般情況：假手術(shù)組大鼠毛色有光澤，雙目靈活有神，行動(dòng)敏捷，對(duì)周圍變化反應(yīng)靈敏；模型組大鼠后期毛色逐漸失去光澤，精神萎靡，行動(dòng)遲緩，倦臥；法舒地爾組大鼠一般狀態(tài)較模型組好。 2.心肌重構(gòu)的形態(tài)學(xué)與組織學(xué)指標(biāo)：模型組和法舒地爾藥物干預(yù)組的HW、LVFWW、LVHI均高于假手術(shù)組(p＜0.01)。模型組心肌細(xì)胞變性，出現(xiàn)局灶性、片狀壞死，心肌纖維粗大斷裂，心肌細(xì)胞核固縮，間質(zhì)明顯水腫；法

5、舒地爾藥物干預(yù)組心肌細(xì)胞肥大，輕度變性，心肌纖維無斷裂，心肌細(xì)胞核形狀略不整，心肌間質(zhì)輕度水腫。模型組大鼠心?、笮湍z原IOD(127.10±2.70)明顯增高，與假手術(shù)組(74.12±0.74)比較有極顯著的差異；法舒地爾干預(yù)后Ⅲ型膠原IOD(91.37±1.58)，較模型組比較有明顯的下降(P＜0.01)。 3.血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)檢測(cè)：觀察期滿后，模型組INSP(149.80±8.40 VS 102.72±7.40)、LVEDP(

6、4.48±0.83 VS 1.85±0.92)明顯增加，與假手術(shù)組相比，兩者間存在顯著差異(P＜0.01)，法舒地爾組治療4周后，LVSP(121.20±7.60mmHg)、LVEDP(3.70±0.72mmHg)較模型組明顯降低(P＜0.01)，模型組大鼠尾動(dòng)脈壓較假手術(shù)組亦有所升高，法舒地爾組尾動(dòng)脈較模型組低，但兩組間差異不明顯。 4.心肌組織TGF-β2檢測(cè)：轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β 2的含量在模型組亦明顯升高(IOD為20.46

7、±1.79)，與假手術(shù)組(5.02±0.14)比較，兩者間存在顯著差異(P＜0.01)；法舒地爾治療后可以明顯抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β 2的表達(dá)(12.17±0.82)，與模型組比較，兩者存在明顯差異(P＜0.01)。 5.心肌組織RhoA，Rock1mRNA的表達(dá)：以β-actin為內(nèi)參對(duì)照，結(jié)果以RhoAmRNA、Rock1mRNA與β-actin mRNA灰度值的比值表示。模型組灰度值較假手術(shù)組(RhoA mRNA1.42±0

8、.08 VS 0.69±0.05，Rock1mRNA1.29±0.04 VS 0.58±0.02)明顯升高，二者之間存在著差異性(P＜0.01)。法舒地爾組經(jīng)藥物干預(yù)4周后，其RhoA mRNA灰度值(0.85±0.03)、Rock1mRNA灰度值(0.83±0.03)與模型組比較明顯降低，兩者之間差異亦十分顯著(P＜0.01)。且RhoA，Rock1mRNA的表達(dá)與左室重量、左室肥厚指數(shù)呈正相關(guān)。 結(jié)論: 1.Rho/