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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1.觀察壓力超負(fù)荷大鼠心肌中羥脯氨酸(HYP)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)等相關(guān)指標(biāo),并探討丹參酮IIA(TanIIA)對(duì)其影響。
2.觀察TanIIA對(duì)血紅素加氧酶-1(HO-1)蛋白表達(dá)水平和HO-1mRNA基因表達(dá)的影響,檢測(cè)氧化應(yīng)激產(chǎn)物超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)的活力以及丙二醛(MDA)含量,探究氧化應(yīng)激與心室重構(gòu)的關(guān)系以及T
2、anIIA的抗氧化作用。
方法:
1.6周齡雄性、健康的SD大鼠共40只,按隨機(jī)編號(hào)擇出8只作為假手術(shù)組(Sham組),剩下的32只行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)制備壓力超負(fù)荷模型,4周后,將造模存活的22只大鼠再次隨機(jī)分為3組,即模型組(Model組,n=7)、丹參酮IIA組(TanIIA組,n=7)及丹參酮IIA+HO-1抑制劑鋅原卟啉組(TanIIA+ZnPP組,n=8)。Sham組未出現(xiàn)大鼠死亡。Sham組和Model組均
3、以生理鹽水(NS)(4ml/kg·d,腹腔注射);TanIIA組以丹參酮IIA磺酸鈉注射劑(STS)(20mg/kg·d,腹腔注射);TanIIA+ ZnPP組以(STS20mg/Kg· d+ZnPP注射劑1mg/kg·d,腹腔注射),持續(xù)給藥4周。
2.手術(shù)8周末將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死,摘取其心臟并及時(shí)準(zhǔn)確稱取體質(zhì)量(BW)、心臟質(zhì)量(HW)以及左心室質(zhì)量(LVW),算出心臟質(zhì)量指數(shù)(HWI=HW/BW)、左心室質(zhì)量指數(shù)(LVWI=
4、LVW/BW),來(lái)判斷心室肥厚的程度;HE染色和Masson染色可在光學(xué)顯微鏡下觀測(cè)其心肌形態(tài)學(xué)上的改變;堿水法檢測(cè)心肌中HYP含量;免疫組織化學(xué)法分析心肌中α-SMA的表達(dá)程度;蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blotting)檢測(cè)心肌中TGF-β1、HO-1的蛋白含量;Real time-PCR(RT-PCR)方法測(cè)定HO-1mRNA基因表達(dá)情況;檢測(cè)血漿中SOD、GSH-Px活力和MDA的含量。
結(jié)果:
1.
5、各組大鼠HWI和LVWI的比較
Model組大鼠HWI和LVWI值分別為(3.80±0.18)mg/Kg、(3.40±0.16) mg/Kg,較Sham組[HWI(2.98±0.15)mg/Kg、LVWI(2.56±0.12)mg/Kg]明顯增高(P<0.01);TanIIA組HWI和LVWI分別為(3.27±0.18)mg/Kg、(2.91±0.21)mg/Kg; TanIIA+ZnPP組HWI和LVWI分別為(3.49±0
6、.16)mg/Kg、(3.12±0.20)mg/Kg,兩組較Model組均有所下降(P<0.01或P<0.05),而TanIIA組的下降更為明顯。
2.各組大鼠心肌組織中HE染色和Masson染色結(jié)果的比較
HE染色結(jié)果,Sham組光鏡下壞死灶不明顯,心肌間質(zhì)及微血管顯示正常,細(xì)胞布列齊整,且胞質(zhì)染色均勻;與Sham組對(duì)比,Model組的心肌纖維變粗且布列雜亂,可以見(jiàn)到心肌斷裂和細(xì)胞核固縮深染,周?chē)休^多的膠原纖維包
7、繞,間質(zhì)有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);而TanIIA組和TanIIA+ZnPP組與Model組相較有不同程度的改善,TanIIA改善更加明顯;Masson染色結(jié)果顯示,心肌細(xì)胞染呈紅色而膠原纖維呈藍(lán)色,結(jié)果顯示與Sham組對(duì)比,Model組的膠原沉積現(xiàn)象明顯加重;而TanIIA組和TanIIA+ZnPP組與Model組相較均有不同程度減輕,TanIIA減輕更加明顯。
3.各組大鼠心肌中HYP含量的比較
與Sham組相比,Model
8、組大鼠心肌中HYP的含量明顯增加(P<0.01);與Model組相比,TanIIA組和TanIIA+ZnPP組HYP含量降低(P<0.01或P<0.05),TanIIA組降低更為明顯。
4.各組大鼠心肌中α-SMA表達(dá)水平的比較
與Sham組相比,Model組大鼠心肌中α-SMA的免疫組化陽(yáng)性表達(dá)水平增長(zhǎng)明顯(P<0.01);與Model組相比,TanIIA組和TanIIA+ZnPP組中α-SMA的陽(yáng)性表達(dá)水平降低(
9、P<0.01或P<0.05),TanIIA組下降更為顯著。
5.各組大鼠心肌中TGF-β1蛋白表達(dá)水平的比較
Model組大鼠心肌中TGF-β1的蛋白表達(dá)程度與Sham組相比增長(zhǎng)明顯(P<0.01);與Model組相比,TanII組和TanIIA+ZnPP組中TGF-β1的蛋白表達(dá)水平均降低(P<0.01或P<0.05),而TanIIA組下降更為顯著。
6.各組大鼠心肌中HO-1蛋白表達(dá)水平的比較
10、 與Sham組相比,Model組大鼠心肌中HO-1的蛋白表達(dá)水平升高(P<0.01);在四組中,TanIIA組的蛋白表達(dá)水平最高(與Model組相比P<0.05),當(dāng)加用了HO-1抑制劑ZnPP后,HO-1的蛋白表達(dá)水平較TanIIA組有所下降(P<0.01)。
7.各組大鼠心肌中HO-1mRNA基因表達(dá)的比較
與Sham相比,Model組大鼠心肌中HO-1mRNA基因表達(dá)水平升高(P<0.01);在四組中,TanI
11、IA組的HO-1mRNA基因表達(dá)水平最高(與Model組相比P<0.05),當(dāng)加用了HO-1抑制劑ZnPP后,HO-1mRNA的基因表達(dá)水平較TanIIA組有所下降(P<0.01)。
8.各組大鼠血漿中SOD、GSH-Px活力和MDA含量的比較
與Sham組相比,Model組大鼠血漿中抗氧化酶SOD、GSH-Px的活力降低,而氧化產(chǎn)物MDA的含量則升高(P<0.01);與Model組相比,TanIIA組和TanIIA
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