C5a對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)血栓調(diào)節(jié)蛋白的影響.pdf

1、膿毒癥導(dǎo)致多臟器功能障礙綜合征（MODS）的發(fā)病機(jī)理主要與失控的宿主防御反應(yīng)導(dǎo)致炎癥、內(nèi)皮損傷、凝血亢進(jìn)、纖溶減弱等有關(guān)。血管內(nèi)皮細(xì)胞（VEC）是血管內(nèi)皮基本的結(jié)構(gòu)和功能單位，恒定地暴露于血流中，其表面受體易受到多種因素的影響，可使VEC合成、表達(dá)炎癥和凝血相關(guān)的因子。 補(bǔ)體活化產(chǎn)物C5a在膿毒癥及其并發(fā)的MODS發(fā)病過程中，既可通過趨化白細(xì)胞和激活炎癥效應(yīng)細(xì)胞表達(dá)促炎分子參與全身炎癥反應(yīng)；也可直接激活炎癥靶細(xì)胞VEC、中性粒細(xì)

2、胞（PMN），促使其表達(dá)多種粘附分子，誘導(dǎo)PMN與VEC黏附和跨膜。同時(shí)，C5a也可刺激VEC產(chǎn)生組織因子而參與血管內(nèi)凝血的啟動(dòng)，在局部C5a還能調(diào)節(jié)炎癥介質(zhì)的表達(dá)、促進(jìn)趨化PMN聚集、誘導(dǎo)PMN脫顆粒，造成VEC的炎癥損傷，這些均成為C5a在膿毒癥中引起MODS的病理基礎(chǔ)。而C5a參與以上組織炎癥反應(yīng)、損傷及微循環(huán)障礙主要通過炎癥細(xì)胞的C5a受體（C5aR）介導(dǎo)；阻斷C5a與C5aR的相互作用有望抑制其產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)、損傷及微循環(huán)障礙

3、的病理過程。 血栓調(diào)節(jié)素（TM，CD141）是血管VEC合成的一種膜表面糖蛋白，是VEC表面的凝血酶受體之一，在抗凝血與抗炎方面都有著重要作用，而凝血、炎癥又是膿毒癥臟器損傷的病理基礎(chǔ)，同時(shí)C5a也是誘發(fā)膿毒癥的原因之一。因此，探討C5a對(duì)TM在。VEC上的表達(dá)的影響及其機(jī)制可以為指導(dǎo)膿毒癥的治療提供一個(gè)新的方向。 目的：探討補(bǔ)體C5a對(duì)人臍靜脈VEC（HUVECs）血栓調(diào)節(jié)蛋白（TM）表達(dá)的影響。 方法：通過建

4、立HUVEC體外培養(yǎng)，觀察1、以終濃度200 ug/L重組人C5a（rh-C5a）刺激HUVECs8、12、16、20 h以及以終濃度100、200、300ug/L的C5a刺激HUVECs12 h；2、以終濃度為200ug/L的C5a分別刺激HUVECs4、8、12h時(shí)即用自主合成的C5aR反義肽（R4）以終濃度為2mg/L進(jìn)行干預(yù)，以16小時(shí)作為刺激終點(diǎn)；3、以終濃度為2ug/ml的BAY11-7082[核因子-κB（NF-κB）的抑

5、制劑]在37℃孵育1小時(shí)后，再以終濃度為200ng/ml的C5a作用于HUVECs12小時(shí)。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、蛋白免疫印跡法（Western blot）分別檢測(cè)TM的mRNA及蛋白表達(dá)變化；觀察C5a對(duì)其表達(dá)TM的量-效和時(shí)-效關(guān)系、R4的拮抗效能及NF-κB信號(hào)通路的作用。 結(jié)果： 1、C5a抑制了HUVECs在TM的mRNA和細(xì)胞膜表面蛋白水平表達(dá)。同時(shí)，C5a對(duì)TM表達(dá)的抑制作用存在量-效關(guān)系（蛋白比（106

6、）：1.1325±0.0397，0.8018±0.0256，0.7322±0.0436：mRNA比（10-4）：4.0177±0.2046，0.3611±0.0351，0.1819±0.0146）和時(shí)-效關(guān)系（蛋白比：0.9311±0.01567，0.7105±0.03391，0.6548±0.04285，0.6269±0.04031；mRNA（10-4）：3.0171±0.8040，0.3829±0.2024，0.0882±0.002

7、7，0.0705±0.0080）；TM的mRNA水平于200 ug/L C5a刺激12 h后降低程度明顯減緩，蛋白水平于300 ug/LC5a刺激12 h后降低程度明顯減緩。 2、在mRNA和細(xì)胞膜表面蛋白水平，R4均能減少C5a降低HUVECs表達(dá)TM的程度，且越早進(jìn)行干預(yù)其效果越明顯。 3、NF-κB信號(hào)通路被阻斷后，減弱了C5a對(duì)HUVECs在TM的mRNA和細(xì)胞膜表面蛋白水平表達(dá)的抑制作用。 結(jié)論：