辛伐他汀對LPS誘導血管內(nèi)皮細胞eNOS-iNOS表達的影響.pdf

1、[目的]
　　 研究辛伐他汀對LPS誘導血管內(nèi)皮細胞不同時間點的內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、誘導型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA及蛋白表達的影響,初步探討辛伐他汀在膿毒癥中調(diào)節(jié)磷脂酰肌醇-3磷酸/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信號轉(zhuǎn)導通路的可能分子機制,為臨床應用提供理論支持。
　　 [方法]
　　 體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞株ECV304,將細胞培養(yǎng)于25ml培養(yǎng)瓶及接種于6孔培養(yǎng)板,分對照(Control

2、)組、LPS組、LPS+辛伐他汀組以及LPS+Sta+PI3K抑制劑組,分別加溶劑、LPS、LPS+辛伐他汀、LPS+辛伐他汀+Ly294002處理各組細胞,分別在2h,6h,12h時間提取各組細胞mRNA,用RT-PCR測內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、誘導型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表達量。取6h時間點裂解各組細胞,用Western-blot的方法測其裂解液的eNOS及iNOS蛋白表達水平,該實驗重復三次。
　　 [結(jié)

3、果]
　　 1.各組細胞不同時點內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表達
　　 Control組各時間點均有少量表達,各時間點變化不明顯(p＞0.05);LPS組2h時間點起,且隨時間推移,表達量逐漸減少,有明顯的時效性,組內(nèi)各時點比較差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.01),與對照組相比,2h稍有增加(p＜0.05),6h、12h表達量顯著減少(p＜0.05);LPS+Sta組的表達量趨勢與LPS組類似,但各時點表達較LPS

4、組明顯增加(p＜0.01),組內(nèi)各時點比較差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.01);LPS+Sta+Ly組的各時點表達量明顯低于LPS+Sta組(p＜0.05),其表達趨勢與LPS組類似但2h和6h高于LPS組(p＜0.01),組內(nèi)各時點比較差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.01)。
　　 2.各組細胞不同時點誘導型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表達
　　 Control組iNOS mRNA微量表達,各時間點變化不明顯(p＞0.05)

5、;LPS組各時點與對照組的相比顯著增高(p＜0.01),從2h開始開始升高,6h達高峰,12h開始下降,有明顯的時效性,組內(nèi)各時點比較差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.01);LPS+Sta組各時點表達也升高,變化規(guī)律類似LPS組,但各時點顯著低于LPS組(p＜0.05),組內(nèi)各時點比較差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.01);LPS+Sta+Ly組的表達量趨勢與LPS組類似,且各時點表達量較LPS+Sta組顯著增加(p＜0.05),組內(nèi)各時點比較差異

6、有統(tǒng)計學意義(p＜0.01)。
　　 3.不同干預組細胞內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表達
　　 藥物干預后6h各組細胞裂解液的Western-blot結(jié)果顯示Control組有一定量的基礎表達,LPS組表達顯著降低,與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.01),LPS+Sta組表達顯著增加,與LPS組及對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(p＜0.01),但LPS+Sta+Ly組的表達較LPS+Sta組明顯減少(p＜0.0

7、1),但仍高于LPS組(p＜0.01),而與對照組的水平相近(p＞0.05)。
　　 4.不同干預組細胞誘導型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表達
　　 藥物干預后6h時各組細胞裂解液的Western-blot結(jié)果顯示Control組有微量表達,LPS組表達較對照組顯著增加(p＜0.01),LPS+Sta組表達較LPS組明顯減少但仍高于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(p＜0.01),LPS+Sta+Ly組的表達較LPS+Sta組

8、及對照組均明顯增加(p＜0.01),但較LPS組有所減少(p＜0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.辛伐他汀能逆轉(zhuǎn)LPS所誘導內(nèi)皮細胞eNOS mRNA和蛋白的表達下降。
　　 2.辛伐他汀能抑制LPS所誘導內(nèi)皮細胞iNOS mRNA和蛋白的過量表達。
　　 3.辛伐他汀可能是通過激活PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導通路增加eNOS mRNA和蛋白的表達,抑制iNOS mRNA和蛋白的過量表達從而調(diào)整eNOS/