RhoA-mDia1對(duì)LPS誘導(dǎo)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞磷酸化ERM水平的影響.pdf

1、目的：
　　探討脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）對(duì)大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞（PMVEC）表達(dá)埃茲蛋白-根蛋白-膜突蛋白（ERM）及磷酸化ERM（p-ERM）水平的影響，并初步探討RhoA/mDia1與ERM蛋白磷酸化的關(guān)系。
　　方法：
　　取購自安徽省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的健康雄性、體質(zhì)量100～120 g、SPF級(jí)SD大鼠的肺臟，體外培養(yǎng)PMVEC，隨機(jī)（隨機(jī)數(shù)字法）分為L(zhǎng)PS量效組(0、0.1、1、10

2、μg/ml LPS分別與PMVEC孵育30 min，n=8）、時(shí)效組（10μg/ml LPS與PMVEC孵育0、15、30、60、90、120 min，n=8）和干預(yù)組(分別以1μg/ml C3 transferase+10μg/ml LPS、1μg/ml C3 transferase與PMVEC孵育，此兩組需要將C3 transferase與PMVEC預(yù)孵育240 min，然后向C3+LPS組中再加入LPS孵育30 min，同時(shí)另設(shè)空

3、白對(duì)照組與10μg/ml LPS單獨(dú)刺激組，n=8），Western印跡檢測(cè)ERM、p-ERM及mDia1表達(dá)量，多組變量間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)方法分析，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.PMVEC中表達(dá)ERM、p-ERM及mDia1蛋白。
　　2.量效組p-ERM水平和mDia1表達(dá)量隨LPS濃度（0、0.1、1、10μg/ml)增加而升高，p-ERM水平分別為0.

4、520±0.101、0.657±0.092、0.891±0.167、1.227±0.106（F=39.600，除0.1μg/ml組與對(duì)照組比較P＞0.05外；其余各組與對(duì)照組比較P＜0.01)，mDia1分別為0.200±0.102、0.430±0.121、0.603±0.154、0.887±0.204（F=22.346，各組與對(duì)照組比較P＜0.05）。
　　3.時(shí)效組ERM磷酸化水平于15 min開始上升（0.670±0.149

5、），30 min達(dá)高峰（1.175±0.103），之后下降,60 min(0.959±0.189),90 min(0.842±0.129),120 min仍持續(xù)較高水平(0.767±0.097)，表達(dá)量均高于對(duì)照組（0.471±0.157），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=23.528,各時(shí)間組與對(duì)照組比較P＜0.05）；mDia1表達(dá)量于15 min開始上升（0.779±0.035），30 min達(dá)高峰（0.889±0.036）,之后下降，6

6、0 min（0.648±0.019），90 min（0.582±0.068）,120 min仍持續(xù)較高水平(0.526±0.059),均高于對(duì)照組（0.284±0.118），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=177.090，均P＜0.01）。
　　4. C3 transferase能顯著下調(diào)LPS誘導(dǎo)的p-ERM的表達(dá)（對(duì)照組：0.339±0.069；LPS組：0.634±0.191；C3組：0.352±0.071；C3+LPS組：0.438

7、±0.07, F=6.832,C3+LPS組與LPS組比較，P=0.01），mDia1也被C3 transferase抑制（對(duì)照組：0.449±0.122；LPS組：0.622±0.174；C3組：0.404±0.164；C3+LPS組：0.380±0.148, F=20.735，C3+LPS組與LPS組比較P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.體外培養(yǎng)大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞，表達(dá)ERM、p-ERM和mDia1蛋白；