美國捐獻(xiàn)的中期保存角膜復(fù)雜環(huán)境運輸前后內(nèi)皮細(xì)胞活性研究.pdf

1、背景:據(jù)2008年第2次全國殘疾人抽樣調(diào)查統(tǒng)計，中國目前共有視力殘疾1233萬人，其中因角膜病致盲約400萬人，角膜病為第2位致盲原因。其中大部分角膜病致盲患者可以通過角膜移植手術(shù)重見光明。由于角膜供體來源嚴(yán)重匱乏，我國每年角膜移植手術(shù)的數(shù)量僅為4000～5000例，其中部分采用我國供體捐獻(xiàn)角膜，保存方法以短期保存為主，多不超過24小時。小部分采用美國供體捐獻(xiàn)角膜，保存方法以M-K液及Optisol液中期保存為主，保存時間4d-14d。

2、極小部分采用長期冷凍或甘油保存。相比之下，中期保存角膜更有利于受體與供體對接，同時使受體獲得質(zhì)量較高角膜[2]。為使角膜盲患者提供進(jìn)一步的復(fù)明機(jī)會，在我國角膜捐獻(xiàn)不能滿足實際臨床需要之前，擴(kuò)大角膜供體源，沈陽陸軍總院采用美國捐獻(xiàn)角膜，給角膜盲患者帶來福音，但由于捐獻(xiàn)及接收原因，無形中使角膜獲得至臨床應(yīng)用的運輸及保存時間延長，復(fù)雜及長時間的運輸條件，對角膜保存技術(shù)及質(zhì)量提出了更高要求，為使我國角膜盲患者用上合格高質(zhì)量角膜，手術(shù)更可靠，要求

3、對供體角膜質(zhì)量進(jìn)行快速、客觀及系統(tǒng)評價，其中以內(nèi)皮細(xì)胞活性及數(shù)目最為關(guān)鍵。而內(nèi)皮細(xì)胞對于角膜移植，術(shù)后角膜移植排斥，角膜水腫等并發(fā)癥有重要意義，評價內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)長途長時間復(fù)雜環(huán)境運輸直至臨床應(yīng)用前活性及質(zhì)量，從而探討角膜中長期保存意義。本文研究對2012年3月至2013年3月我院接受美國捐獻(xiàn)角膜共77例，總結(jié)如下。
　　目的:評價中期保存角膜經(jīng)復(fù)雜環(huán)境長時間長距離運輸后的質(zhì)量及臨床適用性，進(jìn)而為指導(dǎo)我國角膜保存及運輸規(guī)范化提供依據(jù)。

4、
　　方法:對2012年3月～2013年3月我院接受并應(yīng)用于臨床的角膜77例按運輸時間長短及采用保存液不同進(jìn)行分組，通過對內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行臺盼藍(lán)-茜素紅染色、病理切片及掃描和透射電鏡檢查，對其內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目、活性及超微結(jié)構(gòu)系統(tǒng)分析。
　　結(jié)果:
　　1.內(nèi)皮細(xì)胞存活率及數(shù)目:中期4d-7d(Ⅰ)及8d-14d(Ⅱ)保存組角膜內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目無明顯差異(P＞0.05)，且兩組與超過14d(Ⅲ)保存組之間存在明顯差異(P＜0.05)

5、，且細(xì)胞多呈六角形（圖3）。M-K液及Optisol液保存組內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目無明顯差異(P＞0.05)。
　　2.內(nèi)皮細(xì)胞存活率:超14d保存組（M-K液1例及Optisol液3例）內(nèi)皮細(xì)胞存活率均明顯下降，臺盼藍(lán)染色示細(xì)胞核大量藍(lán)染（圖1，2），不適用于臨床，放棄穿透性及內(nèi)皮細(xì)胞角膜移植。
　　3.病理切片檢查:篩選最佳病理切片（圖4-9），可見Ⅰ、Ⅱ組角膜五層結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)皮細(xì)胞呈單層連續(xù)貼附于后彈力層后，細(xì)胞核深紫色，細(xì)胞壁

6、完整。Ⅲ組內(nèi)皮細(xì)胞完全脫失。
　　4.內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察:
　　4.1 篩選最佳保存掃描電鏡可見Ⅰ組及Ⅱ組角膜內(nèi)皮細(xì)胞多呈六角形，連接緊密，大小均勻，表面平整，微絨毛豐富（圖10），Ⅲ組內(nèi)皮細(xì)胞失去正常結(jié)構(gòu)，間隙增大，部分細(xì)胞壁溶解，表面絨毛脫落（圖11）。
　　4.2 對應(yīng)透射電鏡可見Ⅰ組和Ⅱ組角膜內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞膜和核完整，細(xì)胞核呈長橢圓形，且均勻平整，微絨毛豐富（圖12）。Ⅲ組內(nèi)皮細(xì)胞部分核溶解，線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)