β2糖蛋白Ⅰ抑制糖基化終末產(chǎn)物促猴視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞血管新生的研究.pdf

1、目的：
　　糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)是糖尿病主要的微血管并發(fā)癥之一，以血管新生為病變特征的增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變(PDR)是糖尿病患者致盲的重要原因。已有研究表明糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)水平與增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變嚴(yán)重程度呈正相關(guān)關(guān)系，即AGEs可能參與PDR發(fā)病。我們前期研究結(jié)果提示第Ⅴ結(jié)構(gòu)域缺失型β2糖蛋白Ⅰ(β2-GPI DomainⅠ-Ⅳ)可抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞血管新生。本研究以猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞(RF/6A)為研

2、究對(duì)象，旨在探討：
　　1.DI-Ⅳ對(duì)AGEs促RF/6A血管新生作用的影響；
　　2.DI-Ⅳ影響AGEs促RF/6A血管新生作用的機(jī)制。
　　方法：
　　1.培養(yǎng)RF/6A細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)共分為5組：①NC組為對(duì)照組不加干預(yù)因素；②AGEs組加入100μg/ml AGEs；③10 nM DI-Ⅳ組加入100μg/ml AGEs及10nM DI-Ⅳ；④100 nM DI-Ⅳ組加入100μg/ml AGEs及100 n

3、M DI-Ⅳ；⑤400nM DI-Ⅳ組加入100μg/ml AGEs及400 nM DI-Ⅳ。
　　2.分別用MTS法、“傷口愈合”實(shí)驗(yàn)和體外Matrigel法研究不同濃度DI-Ⅳ對(duì)AGEs促RF/6A細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移以及新生血管形成的影響。
　　3.用實(shí)時(shí)定量PCR法研究DI-Ⅳ對(duì)AGEs干預(yù)下RF/6A VEGF受體VEGFR-1(Flt-1)、VEGFR-2(KDR)mRNA表達(dá)的影響。
　　4.用Wester

4、n Blot法研究DI-Ⅳ對(duì)AGEs干預(yù)下RF/6A VEGF細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑關(guān)鍵蛋白Akt蛋白磷酸化的影響。
　　結(jié)果：
　　1.AGEs能明顯刺激RF/6A細(xì)胞增殖(p<0.05)，此作用能被不同濃度DI-Ⅳ所抑制，其中10 nM和400 nM DI-Ⅳ的抑制作用最強(qiáng)(p<0.01)。
　　2.AGEs明顯增加RF/6A向裸露區(qū)遷移率達(dá)1.55倍(p<0.01)，加入不同濃度DI-Ⅳ后，這種遷移受到不同程度抑制，

5、其中400 nM DI-Ⅳ的抑制作用最強(qiáng)，高達(dá)47.6％(p<0.05)。
　　3.AGEs能明顯促進(jìn)RF/6A體外血管形成達(dá)70％(p<0.01)，加入不同濃度DI-Ⅳ，此血管形成受到不同程度地抑制，其中400 nM DI-Ⅳ的抑制作用最大，高達(dá)27.4％(p<0.05)。
　　4.AGEs能明顯降增加VEGFR-2 mRNA表達(dá)量(p<0.01)，不同濃度DI-Ⅳ均能抑制其表達(dá)，400 nM DI-Ⅳ的抑制作用最強(qiáng)(p<

6、0.01)。各組間VEGFR-1 mRNA表達(dá)量相當(dāng)，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　5.AGEs干預(yù)細(xì)胞后，明顯增加Akt蛋白磷酸化(p<0.05)，不同濃度DI-Ⅳ可不同程度地抑制其磷酸化(p<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1.AGEs能促進(jìn)RF/6A細(xì)胞增殖、遷移及管腔形成，可能機(jī)制為增加VEGFR-2表達(dá)，活化Akt以及下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
　　2.DI-Ⅳ能拮抗AGEs促RF/6A細(xì)胞增殖、遷移及管腔形成的作用，可