β2糖蛋白Ⅰ抑制糖基化終末產(chǎn)物促猴視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞血管新生的研究.pdf

1、目的：
　　糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)是糖尿病主要的微血管并發(fā)癥之一，以血管新生為病變特征的增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變(PDR)是糖尿病患者致盲的重要原因。已有研究表明糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)水平與增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變嚴重程度呈正相關(guān)關(guān)系，即AGEs可能參與PDR發(fā)病。我們前期研究結(jié)果提示第Ⅴ結(jié)構(gòu)域缺失型β2糖蛋白Ⅰ(β2-GPI DomainⅠ-Ⅳ)可抑制人臍靜脈內(nèi)皮細胞血管新生。本研究以猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞(RF/6A)為研

2、究對象，旨在探討：
　　1.DI-Ⅳ對AGEs促RF/6A血管新生作用的影響；
　　2.DI-Ⅳ影響AGEs促RF/6A血管新生作用的機制。
　　方法：
　　1.培養(yǎng)RF/6A細胞。實驗共分為5組：①NC組為對照組不加干預因素；②AGEs組加入100μg/ml AGEs；③10 nM DI-Ⅳ組加入100μg/ml AGEs及10nM DI-Ⅳ；④100 nM DI-Ⅳ組加入100μg/ml AGEs及100 n

3、M DI-Ⅳ；⑤400nM DI-Ⅳ組加入100μg/ml AGEs及400 nM DI-Ⅳ。
　　2.分別用MTS法、“傷口愈合”實驗和體外Matrigel法研究不同濃度DI-Ⅳ對AGEs促RF/6A細胞增殖、細胞遷移以及新生血管形成的影響。
　　3.用實時定量PCR法研究DI-Ⅳ對AGEs干預下RF/6A VEGF受體VEGFR-1(Flt-1)、VEGFR-2(KDR)mRNA表達的影響。
　　4.用Wester

4、n Blot法研究DI-Ⅳ對AGEs干預下RF/6A VEGF細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導途徑關(guān)鍵蛋白Akt蛋白磷酸化的影響。
　　結(jié)果：
　　1.AGEs能明顯刺激RF/6A細胞增殖(p<0.05)，此作用能被不同濃度DI-Ⅳ所抑制，其中10 nM和400 nM DI-Ⅳ的抑制作用最強(p<0.01)。
　　2.AGEs明顯增加RF/6A向裸露區(qū)遷移率達1.55倍(p<0.01)，加入不同濃度DI-Ⅳ后，這種遷移受到不同程度抑制，

5、其中400 nM DI-Ⅳ的抑制作用最強，高達47.6％(p<0.05)。
　　3.AGEs能明顯促進RF/6A體外血管形成達70％(p<0.01)，加入不同濃度DI-Ⅳ，此血管形成受到不同程度地抑制，其中400 nM DI-Ⅳ的抑制作用最大，高達27.4％(p<0.05)。
　　4.AGEs能明顯降增加VEGFR-2 mRNA表達量(p<0.01)，不同濃度DI-Ⅳ均能抑制其表達，400 nM DI-Ⅳ的抑制作用最強(p<

6、0.01)。各組間VEGFR-1 mRNA表達量相當，沒有統(tǒng)計學差異。
　　5.AGEs干預細胞后，明顯增加Akt蛋白磷酸化(p<0.05)，不同濃度DI-Ⅳ可不同程度地抑制其磷酸化(p<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1.AGEs能促進RF/6A細胞增殖、遷移及管腔形成，可能機制為增加VEGFR-2表達，活化Akt以及下游信號轉(zhuǎn)導通路。
　　2.DI-Ⅳ能拮抗AGEs促RF/6A細胞增殖、遷移及管腔形成的作用，可