β-,2-糖蛋白Ⅰ抑制內(nèi)皮細(xì)胞血管生成的機(jī)理研究.pdf

1、目的：在增殖型糖尿病視網(wǎng)膜病變中，新生血管出現(xiàn)是其主要標(biāo)志。由于新生血管管壁穩(wěn)定性差而易出血，機(jī)化后纖維組織牽拉引起視網(wǎng)膜脫離，是失明的主要原因。斑塊內(nèi)血管新生可能是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的一個(gè)核心事件，是促進(jìn)穩(wěn)定型斑塊向不穩(wěn)定型斑塊發(fā)展的重要機(jī)制。新生血管的研究對(duì)于糖尿病血管并發(fā)癥的防治具有重要的意義。
　　 VEGF在血管新生中起重要的調(diào)節(jié)作用。通過(guò)與內(nèi)皮細(xì)胞上兩種主要受體VEGF-R1和VEGF-R2結(jié)合，經(jīng)由Ras-Ra

2、f-MEK通路，激活細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶1/2，促進(jìn)細(xì)胞增殖。另外還能激活磷脂酰肌醇激酶-Akt-糖原合成酶3途徑，誘導(dǎo)細(xì)胞遷移和血管形成。尋求一種安全、有效的阻抑VEGF及其受體的藥物，對(duì)于糖尿病血管并發(fā)癥的防治具有重大意義。
　　 內(nèi)容和方法：采用cellTiter96（）AQueous One solution細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、創(chuàng)傷修復(fù)實(shí)驗(yàn)、Matrigel實(shí)驗(yàn)等分別檢測(cè)β2GPI（包括天然型、斷裂型和結(jié)構(gòu)域突變型β2GPI）對(duì)VE

3、GF和bFGF誘導(dǎo)的HUVECs增殖、遷移和血管新生的影響；熒光實(shí)時(shí)PCR分析β2GPI對(duì)VEGF受體mRNA表達(dá)的影響；western印跡分析β2GPI對(duì)VEGF和bFGF誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑的影響；基因芯片技術(shù)分析β2GPI對(duì)HUVECs的影響。為了評(píng)價(jià)2型糖尿病人β2GPI水平與血脂水平及血管病變間的關(guān)系，觀測(cè)了231名2型糖尿病人和119名正常人的相關(guān)指標(biāo)。采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血漿β2GPI，分析各指標(biāo)間的相關(guān)性。

4、　　 結(jié)果：細(xì)胞實(shí)驗(yàn)得到以下結(jié)果：
　　 1.β2GPI、cβ2GPII和DⅠ-Ⅳ抑制VEGF和bFGF誘導(dǎo)的HUVECs增殖、遷移和血管形成（P<0.05或P<0.01），其抑制作用呈劑量依賴性，即隨濃度增高抑制作用增強(qiáng)（P<0.05或P<0.01）。相反，DⅡ-Ⅴ對(duì)VEGF和bFGF誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和血管形成無(wú)影響（P>0.05）。
　　 2.β2GPI抑制HUVECs表面VEGF受體2的mRNA表達(dá)（P<

5、0.05或P<0.01），對(duì)VEGF受體1的mRNA表達(dá)無(wú)影響（P>0.05）。其抑制作用呈劑量依賴性，即隨濃度增高抑制作用增強(qiáng)（P<0.05或P<0.01）。
　　 3.β2GPI抑制VEGF和bFGF的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑（P13K/Akt/GSK3β途徑和MAPK/ERK途徑）。
　　 4.通過(guò)基因芯片技術(shù)，篩查出50種β2GPI降調(diào)節(jié)VEGF調(diào)控的基因。其中IL-8、表皮膜蛋白Ⅰ等細(xì)胞因子，可影響血管形

6、成、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)級(jí)聯(lián)等多種過(guò)程。另外β2GPI還可降調(diào)節(jié)具有轉(zhuǎn)錄功能的活化轉(zhuǎn)錄因子3、鋅指和BTB20域、cbp/p300轉(zhuǎn)錄激活因子等；降調(diào)節(jié)MMP家族的表達(dá)，如MMP-1、MMP-9等，升調(diào)節(jié)MMPs抑制物（TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3等），影響基底膜降解，抑制新生血管形成。
　　 通過(guò)檢測(cè)和分析糖尿病患者的β2GPI水平和其他臨床資料得到以下結(jié)果：
　　 1.糖尿病β2GPI

7、水平較正常人顯著升高；糖尿病β2GPI與高TG、高TC及混合型高血脂有很強(qiáng)的正相關(guān)性（P<0.05或P<0.01）。
　　 2.β2GPI與收縮壓有明顯的正相關(guān)性（P<0.01）。β2GPI也與腎小球病變有關(guān)（與24h尿蛋白有明顯的正相關(guān)性）（P<0.01）。
　　 結(jié)論：天然β2GPI及其結(jié)構(gòu)域突變異構(gòu)體（DI-IV）和斷裂型β2GPI能夠抑制VEGF和bFGF誘導(dǎo)的HuVECs增殖、遷移和血管發(fā)生，通過(guò)抑制VEGF受

8、體2的mRNA表達(dá)，及抑制P13K-Akt-GSK3和MAPK-ERK信號(hào)傳導(dǎo)途徑。另外還通過(guò)抑制IL-8和轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子、MMPs等其他功能性基因影響內(nèi)皮細(xì)胞血管發(fā)生。
　　 β2GPI水平可以反映糖脂代謝紊亂程度，可以作為監(jiān)測(cè)糖尿病病情的指標(biāo)之一；可以作為監(jiān)測(cè)糖尿病腎病及其他腎病的指標(biāo)之一。β2GPI對(duì)血管病變發(fā)生和發(fā)展可以雙向性調(diào)節(jié)。β2GPI輕度升高通過(guò)影響脂代謝而加重血管病變；明顯升高可抑制異常新生血管的形成，減慢血管病