XIAP-ShRNA對老年性聾小鼠聽覺皮層GABA能神經元凋亡的作用.pdf

1、第三軍醫(yī)大學碩士學位論文XIAPShRNA對老年性聾小鼠聽覺皮層GABA能神經元凋亡的作用姓名：吳曉平申請學位級別：碩士專業(yè)：耳鼻咽喉科學指導教師：陳繼川201205第三軍醫(yī)大學碩士學位論文通過GeneBank查找小鼠XIAP全組基因序列，針對該基因設計3條干擾序列，構建成干擾質粒，測序鑒定后命名為XIAP—ShRNA—A、XIAP—ShRNA—B、XIAP—ShRNA—C，經鑒定后在體外細胞水平檢驗其功能及作用效果，即：原代培養(yǎng)孕14

2、～16天C57／BL6J小鼠大腦皮層神經細胞，純化并進行B—tubulin熒光染色鑒定；同批次細胞導入XIAPShRNA干擾質粒，經RT—PCR、western—blot檢測神經元內XIAP表達水平；流式細胞術檢測導入后神經元凋亡情況，證明其功能效果并篩選最佳干擾序列質粒。3活體內檢測XIAPShRNA干擾質粒對老年性聾聽皮層GABA能神經元的作用。在立體定位儀及微量注射儀的幫助下將XIAP—ShRNA質粒導入聽皮層，并于導入前、導入后

3、l4天和1月，檢測ABR，并利用TUNEL法，檢測年輕組及老年組C57BL／6J小鼠聽覺皮層GABA能神經元凋亡，XIAP的表達水平，確定皮層神經元凋亡程度及其與各自對照組差異。并通過檢查聽覺皮層中caspase一3的表達情況探討GABA神經元凋亡的機制。結果：1年輕組小鼠ABR檢測lKHz、2KHz、4KHz、8KHz、l6KHz聽力閾值分別為2350315dBSPL、3275499dBSPL、405536dBSPL、6025573d

4、BSPL、6600619dBSPL，而老年組小鼠在1KHz、2KHz、4KHz、8KHz、16KHz的聽力閾值為6050669dBSPL、6225402dBSPL、6575455dBSPL、8150477dBSPL、8550444dBSPL。在各個頻率上老年組聽力閾值均比年輕組顯著增高(P00I)。2在年輕組小鼠聽皮層中GABA能神經元凋亡陽性的數目較小，經圖像分析系統(tǒng)計數，TUNEL法結合間接免疫熒光法檢測聽皮層凋亡的GABA能神經元

5、數目約為：1022084，而同樣的方法檢測老年性小鼠聽皮層中凋亡的GABA能神經元數目約為1917406。老年組小鼠比年輕組小鼠聽皮層凋亡的GABA能神經元明顯增多(P001)，而年輕組小鼠聽皮層的GABA能神經元XIAP表達數目較多，經分析計數，其數目為：4783677，老年組小鼠聽皮層的XIAP數目為：1327694，年輕組聽皮層表達XIAP的GABA能神經元明顯多于老年組(P001)。3通過GeneBank查找小鼠XIAP全組基因