鐮形扇頭蜱抗微生物多肽基因的克隆及序列分析.pdf

1、蜱是一類以吸血為生的節(jié)肢動物，是人和動物的許多病原的傳播媒介，包括細菌、真菌、病毒、立克次體、螺旋體和寄生原蟲等多種病原。在中國，已記錄的蜱類近120種，其中10余種具有明顯的醫(yī)學重要性，了解病原在蜱體的傳播機制，特別是病原體與蜱的相互作用關系，對于蜱和蜱傳病的防治具有重要價值?？刮⑸锒嚯淖鳛轵绲南忍煨悦庖咝钟柚?，是研究蜱與病原體的相互作用的重要切入點。 木實驗以鐮形扇頭蜱吸血前后雄蜱唾液腺的抑制消減雜交cDNA文庫中的

2、EST數(shù)據(jù)為基礎，從鐮形扇頭蜱體內(nèi)克隆出M200和M50二個新基因。M200基因全長542bp，編碼100個氨基酸，預測分了量為9.85kDa，，含有典型的信號肽序列，經(jīng)同源性比較，該基因編碼蛋白與與微小牛蜱抗微生物多肽分子Ixodidin序列的顯著同源。M50基因全長410bp，編碼100個氨基酸，預測分子量為9.0kDa，含有典型的信號肽序列，無顯著性同源分子，僅與單一異尖線蟲蛋白酶抑制因子有低度同源。結(jié)構(gòu)上，M200和M50預測蛋

3、白都含有半胱氨酸的抗微生物多肽的典型特征，即在C-末端含有6個保守的半胱氨酸殘基(C…CXXXC…C…CXC)，形成一個稱為CS αβ(cysteine-stabilized αβ)穩(wěn)定的基序(motif)。綜合同源性、結(jié)構(gòu)特征、分子量、信號肽等生物信息學分析結(jié)果，初步預測M200和M50為二個編碼鐮形扇頭蜱抗微生物多肽的新基因。 應用RT-PCR方法分析了M200和M50基因在蜱的不同組織器官和不同發(fā)育階段的表達情況。結(jié)果表明

4、，這二個基因的表達沒有組織特異性；M200在蜱的各個發(fā)育階段卵、幼蜱、若蜱和成蜱均有表達，但M50在蜱的卵、若蜱階段沒有表達。 應用RT-PCR方法分析了M200和M50基因在蜱的吸血前后的表達模式。M200和M50基因在蜱吸血后的轉(zhuǎn)錄量顯著高于未吸血蜱，說明這兩個基因的表達與吸血有關。 成功構(gòu)建了重組表達載體pGEX-4T-1/M200和pGEX-4T-1/M50，并轉(zhuǎn)化到表達苗BL21中，經(jīng)IPTG誘導，結(jié)果表明M2