鐮形扇頭蜱抗微生物多肽基因的克隆及序列分析.pdf

1、蜱是一類以吸血為生的節(jié)肢動(dòng)物，是人和動(dòng)物的許多病原的傳播媒介，包括細(xì)菌、真菌、病毒、立克次體、螺旋體和寄生原蟲等多種病原。在中國，已記錄的蜱類近120種，其中10余種具有明顯的醫(yī)學(xué)重要性，了解病原在蜱體的傳播機(jī)制，特別是病原體與蜱的相互作用關(guān)系，對(duì)于蜱和蜱傳病的防治具有重要價(jià)值?？刮⑸锒嚯淖鳛轵绲南忍煨悦庖咝?yīng)分予之一，是研究蜱與病原體的相互作用的重要切入點(diǎn)。 木實(shí)驗(yàn)以鐮形扇頭蜱吸血前后雄蜱唾液腺的抑制消減雜交cDNA文庫中的

2、EST數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，從鐮形扇頭蜱體內(nèi)克隆出M200和M50二個(gè)新基因。M200基因全長(zhǎng)542bp，編碼100個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)分了量為9.85kDa，，含有典型的信號(hào)肽序列，經(jīng)同源性比較，該基因編碼蛋白與與微小牛蜱抗微生物多肽分子Ixodidin序列的顯著同源。M50基因全長(zhǎng)410bp，編碼100個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)分子量為9.0kDa，含有典型的信號(hào)肽序列，無顯著性同源分子，僅與單一異尖線蟲蛋白酶抑制因子有低度同源。結(jié)構(gòu)上，M200和M50預(yù)測(cè)蛋

3、白都含有半胱氨酸的抗微生物多肽的典型特征，即在C-末端含有6個(gè)保守的半胱氨酸殘基(C…CXXXC…C…CXC)，形成一個(gè)稱為CS αβ(cysteine-stabilized αβ)穩(wěn)定的基序(motif)。綜合同源性、結(jié)構(gòu)特征、分子量、信號(hào)肽等生物信息學(xué)分析結(jié)果，初步預(yù)測(cè)M200和M50為二個(gè)編碼鐮形扇頭蜱抗微生物多肽的新基因。 應(yīng)用RT-PCR方法分析了M200和M50基因在蜱的不同組織器官和不同發(fā)育階段的表達(dá)情況。結(jié)果表明

4、，這二個(gè)基因的表達(dá)沒有組織特異性；M200在蜱的各個(gè)發(fā)育階段卵、幼蜱、若蜱和成蜱均有表達(dá)，但M50在蜱的卵、若蜱階段沒有表達(dá)。 應(yīng)用RT-PCR方法分析了M200和M50基因在蜱的吸血前后的表達(dá)模式。M200和M50基因在蜱吸血后的轉(zhuǎn)錄量顯著高于未吸血蜱，說明這兩個(gè)基因的表達(dá)與吸血有關(guān)。 成功構(gòu)建了重組表達(dá)載體pGEX-4T-1/M200和pGEX-4T-1/M50，并轉(zhuǎn)化到表達(dá)苗BL21中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，結(jié)果表明M2