鐮形扇頭蜱的幾種先天性免疫相關(guān)miRNAs分子研究.pdf

1、蜱是一類專門寄生于脊椎動(dòng)物的體表寄生蟲(chóng)，是多種疾病的傳播媒介。先天性免疫反應(yīng)是蜱與病原互作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，但迄今為止，對(duì)蜱的先天性免疫反應(yīng)機(jī)制了解甚少。MicroRNA，簡(jiǎn)稱miRNA，是生物體內(nèi)18-25 nt的非編碼小RNA，作用于靶基因的3'端非翻譯區(qū)以抑制其表達(dá)或者降解mRNA，在后轉(zhuǎn)錄水平發(fā)揮著生物學(xué)調(diào)控作用，如生長(zhǎng)發(fā)育和先天性免疫等生理學(xué)功能。為了研究蜱的miRNA在先天性免疫反應(yīng)中的作用，本論文在實(shí)驗(yàn)室已有的差異表達(dá)miRNA

2、s數(shù)據(jù)庫(kù)的基礎(chǔ)上，通過(guò)節(jié)肢動(dòng)物的先天性免疫刺激劑——脂多糖(LPS)注射鐮形扇頭蜱，分離鑒定若干蜱的先天性免疫相關(guān)miRNAs分子，為闡明蜱的先天性免疫反應(yīng)機(jī)制提供基礎(chǔ)。
　　本研究結(jié)果包括以下4個(gè)方面:
　　一、通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證了LPS注射后差異表達(dá)（下調(diào)）的5個(gè)miRNAs分子，即miR-184、miR-79-3p、miR-71-5p、miR-1-3p和miR-133-3p，它們的下調(diào)倍數(shù)分別為4.2、3.6、

3、3.4、3.3和5.0。應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄PCR克隆獲得這些miRNAs的前體序列，并且通過(guò)mFold軟件預(yù)測(cè)了這些miRNAs的前體發(fā)夾結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步驗(yàn)證了這些miRNAs。
　　二、通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)這五種miRNAs的表達(dá)具有階段特異性和器官特異性的特點(diǎn)，相比較于其它發(fā)育階段和器官，這五種miRNAs均在幼蜱和脂肪體中表達(dá)量是最高的。
　　三、研究了miR-133-3p在蜱吸血前后不同器官的表達(dá)特征，發(fā)現(xiàn)在吸血后蜱的脂肪

4、體、唾液腺和卵巢的表達(dá)量相較于未吸血時(shí)明顯下調(diào)，下調(diào)倍數(shù)分別為13.3、4.2和15.4;盡管實(shí)驗(yàn)組注射miR-133-3p agomirna后，miR-133-3p在半飽血蜱及其脂肪體表達(dá)量明顯增加，但吸血等生物學(xué)性狀并沒(méi)有顯著差異，表明miR-133-3p在蜱吸血中無(wú)重要作用。但是，miR-133-3p在感染有巴貝斯蟲(chóng)的飽血幼蜱中表達(dá)量顯著下降。
　　四、應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)開(kāi)展了miR-133-3p和miR-79-