人類心臟瓣膜病慢性心房顫動心肌中縫隙連接通道CX43和CX40的重構(gòu).pdf

1、該研究包括以下四個(gè)部分：1研究人類瓣膜病性房顫和竇律狀態(tài)下,縫隙連接蛋白CX40和CX43 mRNA表達(dá)量的變化.取11例風(fēng)濕性心臟瓣膜病病人的右心耳心肌,其中方顫患者8例,竇律3例.男性4例,女性7例.平均年齡50.8±13.7歲,平均心功能2.7級,平均房顫時(shí)間5.6±6.5年.提取所有標(biāo)本的總RNA,等量轉(zhuǎn)移至尼龍膜上,用PCR合成的特異cDNA探針,標(biāo)記上放射性同位素（α-<'32>P-dCTP）后與尼龍膜雜交,然后將雜交膜與X

2、光膠片行放射自顯影,在灰度掃描儀下得到每例標(biāo)本mRNA水平的灰度值,為了進(jìn)一步矯正轉(zhuǎn)膜時(shí)可能的定量不統(tǒng)一,將同一塊雜交膜先后與CX40探針、CX43探針和β-actin雜交,以CX40/β-actin和CX43/β-actin的百分比作為統(tǒng)計(jì)變量進(jìn)行分析,結(jié)果證實(shí)在房顫與竇律標(biāo)本中,CX40和CX43的mRNA表達(dá)量未發(fā)生明顯改變.2激光共聚焦顯微鏡觀察房顫和竇律時(shí)CX40和CX43縫隙連接通道的空間分布.該部分研究采用21例風(fēng)濕性心臟

3、瓣膜病病人的右心耳心肌,其中竇律8例（男3例）,房顫13例（男7例）,房顫持續(xù)時(shí)間從3個(gè)月直至15年.（在第一部分實(shí)驗(yàn)標(biāo)本中,持續(xù)房顫時(shí)間從2個(gè)月至20年,基因等同）.平均年齡49.1±12.8歲,平均房顫時(shí)間5.8±4.2年.標(biāo)本均沿心肌纖維長軸和縱軸行冷凍切片,切片分別先后與抗CX40、抗CX43一抗和FITC熒光素標(biāo)記的二抗共孵育,然后激光共聚焦顯微鏡下觀察.結(jié)果提示,房顫時(shí)CX40通道的側(cè)側(cè)連接大量丟失,而端端連接明顯增多,同時(shí)

4、在大體外觀上,CX40通道的分布明顯紊亂,隨心肌細(xì)胞的腫脹,CX40通道出現(xiàn)“融合”,整體上呈異質(zhì)性分布,而CX43通道的端端、側(cè)側(cè)連接分布與竇律時(shí)變化不大,其在整體上的異質(zhì)性分布也不如CX40通道明顯,而無論房顫還是竇律,兩種縫隙連接通道的平均熒光斑面積無顯著差異.3普通光學(xué)顯微鏡下觀察房顫和竇律時(shí),心房肌組織的病理學(xué)改變.該部分研究所采用標(biāo)本與激光共聚焦顯微鏡觀察標(biāo)本為同一塊標(biāo)本,目的是為了兩者之間的相互比對.結(jié)果顯示,房顫時(shí)心房肌

5、細(xì)胞排列紊亂,腫大與萎縮共存,在間質(zhì)纖維化程度嚴(yán)重區(qū)域,心肌細(xì)胞在橫向上的連接明顯減少,分叉增多.印正了激光共聚焦顯微鏡下觀察到的CX40側(cè)側(cè)連接大量丟失的結(jié)果.4透射電子顯微鏡觀察房顫和竇律時(shí)縫隙連接通道的形態(tài)變化.該部分研究所有標(biāo)本是從以上21例標(biāo)本中選擇12例,房顫與竇律各6例,男6例,女6例,平均年齡49.6±14.8歲,平均房顫年限6.3±5.2年,標(biāo)本經(jīng)超薄切片、染色后在透射電鏡下觀察,結(jié)果發(fā)現(xiàn),房顫時(shí)心房肌縫隙連接通道的長

6、度明顯短于竇律時(shí),兩者之間的差別具有統(tǒng)計(jì)顯著性（P=0.011）.該結(jié)果在房顫發(fā)生發(fā)展中的意義尚不清楚.綜合以下結(jié)果,該研究可得出以下結(jié)論：（1）人類瓣膜病性心房顫動時(shí),心房肌CX40和CX43的mRNA表達(dá)水平未發(fā)生明顯改變.（2）但房顫時(shí)CX40通道的空間分布呈明顯異質(zhì)性,側(cè)側(cè)連接大量丟失,端端連接顯著增多,并有縫隙連接通道“融合”現(xiàn)象.（3）組織病理學(xué)上,房顫時(shí)心房肌細(xì)胞排列紊亂,間質(zhì)纖維增生嚴(yán)重,細(xì)胞間橫向上的連接大量破壞,分叉