p38MAPK在cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎組織的表達(dá)及氟伐他汀的干預(yù)作用.pdf

1、目的：(1)觀察 p38 絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化 p38 絲裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)在不同時期cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎組織的表達(dá)情況,初步探討p38MAPK是否參與了cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠的發(fā)病及病情進(jìn)展；(2)用氟伐他汀作為干預(yù)因素,研究其是否可通過影響p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1的表達(dá)延緩cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎纖維化進(jìn)程,以及不同劑量氟

2、伐他汀對不同時期oGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎臟纖維化的療效差異。 方法：將48只雌性(C57BL/6J×DBA/2)F1代雜交鼠隨機(jī)分成模型對照組(A組)、低劑量氟伐他汀干預(yù)組(B組5mg/(kg·d))、高劑量氟伐他汀干預(yù)組(C組1Omg/(Kg·d))和正常對照組(D組),每組12只。A、B、C組小鼠建立cGVHD狼瘡樣腎炎模型,B、C組小鼠每日氟伐他汀灌胃,A、D組小鼠等體積生理鹽水灌胃。自首次注射淋巴細(xì)胞第二周開始,每隔兩

3、周收集一次各組小鼠24h尿液,并用雙縮脲比色法測定尿蛋白量。第12、16周末分別隨機(jī)處死各組中的6只小鼠(12周組為1組,16周組為2組,即A、B、C、D組小鼠分為A1、B1、C1、D1和A2、B2、C2、D2組),留取腎組織標(biāo)本,采用HE和Masson染色觀察腎臟組織病理學(xué)變化,并用免疫組織化學(xué)及Western blot法檢測p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1蛋白定位及定量表達(dá),應(yīng)用RT-PCR法檢測p38MAPK、TG

4、F-β1mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：(1)cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠自第4周開始出現(xiàn)尿蛋白,且尿蛋白量逐漸升高,A、B、C組各時間點(diǎn)的24h尿蛋白量均高于D組小鼠(P<0.01),經(jīng)氟伐他汀干預(yù)后尿蛋白量明顯下降(P<0.01),C組尿蛋白量與B組比較差異亦有顯著性(P<0.05)；(2)HE染色顯示A組小鼠腎小球系膜細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增生,可見萎縮硬化的腎小球；腎小管擴(kuò)張或呈多灶性萎縮及空泡變性,管腔內(nèi)可見大量蛋白管型,間質(zhì)中有大量單個

5、核細(xì)胞浸潤和基質(zhì)沉積；A2組小鼠腎小球硬化及腎間質(zhì)基質(zhì)沉積較A1組更為明顯；藥物干預(yù)組(B、C組)小鼠上述病變減輕,腎小球細(xì)胞增生減輕,腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤和基質(zhì)沉積減少；Masson染色觀察A1組小鼠腎小球及腎小管間質(zhì)可見少量膠原纖維沉積,A2組小鼠腎組織可見腎小球及腎小管間質(zhì)大量膠原纖維沉積,腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化；(3)A1組小鼠腎組織p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1蛋白表達(dá)及p-p38MAPK活化程度(p-p38

6、MAPK/p38MAPK)較D1組均明顯增強(qiáng)(P<0.01),A2組更加明顯,經(jīng)氟伐他汀干預(yù)后B、C組小鼠腎組織以上蛋白表達(dá)及p-p38MAPK活化程度顯著降低(P<0.05),C組與B組比較降低更為明顯(P<0.05);p-p38MAPK活化程度與TGF-β1表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.818,P<0.01)；(4)A1組小鼠腎組織p38MAPK、TGF-β1mRNA表達(dá)較D1組均明顯增強(qiáng)(P<0.01),A2組更加明顯,B、c組小鼠腎

7、組織p38MAPK、TGF-β1mRNA的表達(dá)顯著降低(P<0.05),C組與B組比較其表達(dá)降低亦有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1在正常腎組織中有少量表達(dá),在cGVHD狼瘡樣腎炎小鼠腎組織中p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1蛋白及p38MAPK、TGF-β1mRNA表達(dá)均顯著升高,且p-p38MAPK活化程度與TGF-β1表達(dá)水平呈正相關(guān),提示p38MAPK可能