Smad4、Smad7在慢性GVHD狼瘡腎炎模型小鼠腎組織表達(dá)及纈沙坦的干預(yù)作用.pdf

1、目的： (1)以Smad蛋白作為研究切入點(diǎn)，Smad4、Smad7作為觀察指標(biāo)，初步探討它們是否參與了慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼瘡腎炎模型小鼠狼瘡腎炎的發(fā)生發(fā)展； (2)用纈沙坦作為干預(yù)因素，來(lái)研究他們是否可通過(guò)影響Smad4、Smad7的表達(dá)從而延緩狼瘡腎炎的發(fā)展。 方法： 將24只雌性(C57BL/6J×DBA/2)F1代雜交鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組(D組、n=6)和模型組(n=18),通過(guò)親代淋

2、巴細(xì)胞移植構(gòu)建慢性GVHD狼瘡腎炎模型，再將模型組隨機(jī)分為模型對(duì)照組(A組、n=6)、纈沙坦中劑量組(B組22.8mg/(kg·d)、n=6)、纈沙坦高劑量組(C組45。6 mg/(kg·d)、n=6)。每日灌胃進(jìn)行藥物干預(yù)，模型對(duì)照組及正常對(duì)照組小鼠灌胃等體積生理鹽水，共12周。自首次注射淋巴細(xì)胞第二周開始，每隔一周收集一次各組小鼠24h尿液，并用雙縮脲比色法測(cè)定尿蛋白量。12周末處死小鼠，留取腎組織標(biāo)本，采用RT-PCR法觀察各組小

3、鼠腎組織Smad4、Smad7mRNA表達(dá)情況，并用HE染色及Masson染色觀察腎臟病理組織學(xué)變化，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Smad4、Smad7蛋白定位表達(dá)。 結(jié)果： (1)慢性GVHD狼瘡小鼠于第4周開始出現(xiàn)尿蛋白，模型對(duì)照組(A組)和治療組(B、C組)的24h尿蛋白量均高于正常對(duì)照組(D組)小鼠(P<0.05)，經(jīng)纈沙坦治療后尿蛋白量明顯下降(P<0.05)，但B、C組尿蛋白量沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)；

4、 (2)A組Smad4、Smad7 mRNA表達(dá)較D組均明顯增強(qiáng)(P<0.05)，經(jīng)纈沙坦干預(yù)后B、C組Smad4、Smad7 mRNA的表達(dá)顯著降低(P<0.05)，而B、C組之間的差異無(wú)顯著性(P>0.05)； (3)HE染色顯示A組小鼠腎組織大多腎小球系膜細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增生，可見部分硬化的腎小球；腎小管呈多灶性萎縮，管腔內(nèi)可見大量蛋白管型；間質(zhì)中有大量單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)和基質(zhì)沉積，治療組(B、C組)上述病變較A組均明顯減輕

5、。Masson染色觀察A組腎組織。腎小球及腎小管間質(zhì)可見少量膠原纖維沉積； (4)D組小鼠腎組織腎小管上皮細(xì)胞可見Smad4、Smad7蛋白表達(dá)，A組Smad4．、Smad7蛋白表達(dá)較D組均明顯增強(qiáng)(P<0.05)，纈沙坦治療組(B、C組)Smad4、Smad7蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.05)，而B、C組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。 結(jié)論： Smad4、Smad7在正常腎組織中有少量表達(dá)，在狼瘡腎炎腎組織中S