Osterix和p38MAPK在慢性氟中毒大鼠骨損傷中的作用研究.pdf

1、目的：在氟中毒動(dòng)物模型復(fù)制的基礎(chǔ)上，觀察不同劑量氟對(duì)SD大鼠股骨成骨細(xì)胞的影響，檢測(cè)氟對(duì)成骨細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子Osterix（OSX）基因及其蛋白表達(dá)的影響；同時(shí)檢測(cè)絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)/p38信號(hào)通路的變化，分析p38 MAPK信號(hào)通路改變與慢性氟中毒骨相損害的關(guān)系，探討其在慢性氟中毒骨損傷發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法：SD大鼠隨機(jī)分為5組（每組12只，雌雄各半），即對(duì)照組、低氟組、高氟組、高氟+SB203580組和高

2、氟+DMSO組；低氟組飲水含氟5mg/L，高氟組、高氟+SB203580組和高氟+DMSO組飲水含氟50mg/L，復(fù)制不同攝氟劑量的慢性氟中毒大鼠模型，試驗(yàn)期為8個(gè)月。高氟+SB203580組大鼠腹腔注射p38MAPK特異性阻斷劑SB203580；高氟+DMSO組大鼠腹腔注射二甲基亞砜（DMSO）。3天后結(jié)束實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)用ELISA方法測(cè)定血清中骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)的變化；用HE染色觀察實(shí)驗(yàn)大鼠骨組織形態(tài)變化、免疫組化檢測(cè)OSX及p38在骨組

3、織中的表達(dá)情況；實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（Real-time PCR）檢測(cè)OSX、p38的基因表達(dá)水平。
　　結(jié)果：成功復(fù)制氟中毒大鼠模型，表現(xiàn)為染氟組有不同程度的氟斑牙發(fā)生，以高劑量組最為嚴(yán)重，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)照組無氟斑牙形成；與對(duì)照組相比，染氟組尿氟和骨氟含量均增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；且呈劑量效應(yīng)關(guān)系。骨形成指標(biāo)骨堿性磷酸酶（BALP）ELISA結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，低氟組和高氟組血清BALP和抗酒石酸酸性磷酸酶-5b（TR

4、ACP-5b）含量均明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與低氟組相比，高氟組大鼠血清BALP含量升高，TRACP-5b含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。骨組織HE染色形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，各染氟組大鼠均表現(xiàn)為骨質(zhì)硬化。免疫組化和Real-time PCR結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，各染氟組OSX和p38蛋白和mRAN表達(dá)增高，p-p38蛋白表達(dá)增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與高氟組和高氟+DMSO組比較，高氟+SB203580組 p-p38蛋白表達(dá)減少，OSX mR