層粘連蛋白-整合素α7β1信號通路對氣道平滑肌細胞分泌功能的影響及機制.pdf

1、研究背景:
　　在哮喘病理發(fā)展過程中,氣道平滑肌細胞(ASMCs)不僅數(shù)量的增加,還有功能的改變;此外還有有細胞外基質(ECM)量的改變和組成的改變。ASMCs能分泌TGF-β、eotaxin等多種免疫調(diào)節(jié)因子,具有重要的免疫調(diào)節(jié)功能。在哮喘病人氣道中,纖維粘連蛋白、Ⅰ型膠原和層粘蛋白等明顯增加。纖維粘連蛋白、Ⅰ型膠原促進ASMCs的增殖及分泌eotaxin等免疫因子,層粘蛋白則抑制ASMCs的增殖。但層粘連蛋白對ASMCs分泌功

2、能的影響尚無文獻報道。層粘連蛋白在黑色素瘤細胞中能通過增加MKP-1的表達抑制腫瘤轉移,由此,層粘連蛋白是否可以通過增加MKP-1的表達來影響氣道平滑肌細胞分泌功能。整合素是ECM與細胞骨架及信號通路連接的橋梁。整合素α7β1表達于氣道平滑肌細胞等細胞,整合素α7特異性的與層粘連蛋白結合,因此,層粘連蛋白是否通過整合素α7β1影響氣道平滑肌細胞分泌功能。
　　目的:
　　探討層粘連蛋白-整合素α7β1信號通路是否能影響ASM

3、Cs表達及分泌TGF-β1、eotaxin-1等因子及其機制。并探討層粘連蛋白對哮喘小鼠的作用。
　　方法:
　　1)細胞實驗:用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)出人氣道平滑肌細胞(HASMCs),將2-5代的HASMCs用于實驗。將HASMCs接種于層粘連蛋白(10ug/ml)包被的培養(yǎng)板及空白培養(yǎng)板中,用整合素α7單抗、β1單抗阻斷層粘連蛋白與HASMCs表面的整合素α7β1結合;用IL-13(20ng/ml)刺激HASMCs模擬哮喘環(huán)

4、境。分為6組:空白組、IL-13組、IL-13+LN組、LN組、IL-13+LN+antiα7組、IL-13+LN+antiβ1組。通過realtimePCR法檢測HASMCs中TGF-β1、eotaxin-1、MKP-1的mRNA表達,ELISA法檢測HASMCs培養(yǎng)上清中TGF-β1、eotaxin-1蛋白,通過WesternBlot檢測HASMCs中MKP-1蛋白表達。
　　2)動物實驗:建立BALB/c小鼠哮喘模型,分3組

5、:正常對照組(用生理鹽水代替OVA),哮喘組,層粘連蛋白組(每次激發(fā)前2h用層粘連蛋白200ug預處理)。用HE染色及PAS染色觀察小鼠氣道炎癥及杯狀細胞增生情況,用ELISA法檢測小鼠肺泡灌洗液(BALF)中IL-4的表達。
　　結果:
　　1)層粘連蛋白-整合素α7β1抑制IL-13誘導的HASMCsTGF-β1、eotaxin-1mRNA表達及蛋白分泌,增加MKP-1mRNA表達及蛋白表達。IL-13組與空白組比較:T

6、GF-β1、eotaxin-1mRNA表達及蛋白分泌增加(p<0.05),MKP-1mRNA及蛋白表達減少(p<0.05);IL-13+LN組與IL-13組比較:TGF-β1、eotaxin-1mRNA表達及蛋白分泌減少(p<0.05),MKP-1mRNA及蛋白表達增加(p<0.05);IL-13+LN+antiα7組、IL-13+LN+antiβ1組與IL-13+LN組比較:TGF-β1、eotaxin-1mRNA表達及蛋白分泌增加(

7、p<0.05),MKP-1mRNA及蛋白表達減少(p<0.05)。
　　2)層粘連蛋白減輕哮喘氣道炎癥及減少杯狀細胞增生,減少BALF中的IL-4,對哮喘具有保護作用。哮喘組與正常對照組比較,氣道炎癥明顯加重,杯狀細胞明顯增生,BALF中IL-4增加(p<0.05);層粘連蛋白組與哮喘組比較,氣道炎癥明顯減輕,杯狀細胞明顯減少,BALF中IL-4減少(p<0.05)。
　　結論:
　　實驗結果表明層粘連蛋白能抑制IL-