AICAR激活A(yù)MPK對卵巢癌細(xì)胞株整合素β4及E-鈣粘連蛋白的影響.pdf

1、中文目的：觀察卵巢癌細(xì)胞整合素β4（Integrinβ4）及E-鈣粘連蛋白（E-cadherin）的表達(dá)，同時觀察單磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）的激活對卵巢癌細(xì)胞整合素β4及E-鈣粘連蛋白表達(dá)的影響。進(jìn)一步為5-氨基咪唑-4-甲酰胺-1-β-D-呋喃核糖苷5-一磷酸鹽（AICAR）是否具有成為針對卵巢癌細(xì)胞AMPK的潛在抗腫瘤藥物，為卵巢腫瘤的治療及預(yù)后提供理論依據(jù)。
　　方法：1、采用卵巢癌細(xì)胞TOV-112D為實驗?zāi)Ｐ图?xì)胞

2、，給予不同細(xì)胞培養(yǎng)密度，蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測空白對照組中卵巢癌細(xì)胞Integrinβ4及E-cadherin的表達(dá)水平；應(yīng)用免疫熒光探針的方法通過激光共聚焦顯微鏡分別觀察空白對照組中卵巢癌細(xì)胞Integrinβ4（紅色熒光）及E-cadherin（紅色熒光）蛋白表達(dá)水平。2、給予AICAR刺激后，蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測空白對照組、條件實驗組及實驗組中卵巢癌細(xì)胞中 AMPKα1、AMPKα

3、1（T172）、Integrinβ4及E-cadherin的表達(dá)水平；應(yīng)用免疫熒光探針的方法，在激光共聚焦顯微鏡下觀察條件實驗組及實驗組中 AICAR對卵巢癌細(xì)胞的Integrinβ4（綠色熒光）及E-cadherin（紅色熒光）蛋白表達(dá)水平的影響。3、應(yīng)用BCECF AM（pH－熒光探針）（綠色熒光）檢測在不同細(xì)胞培養(yǎng)密度下卵巢癌細(xì)胞的空白組、條件實驗組及實驗組中細(xì)胞內(nèi)的酸堿性。
　　結(jié)果：1、Western blot檢測顯示，

4、空白對照組中的卵巢癌細(xì)胞具有較高的Integrinβ4表達(dá)及較低的E-cadherin的表達(dá)；細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示，在空白對照組的卵巢癌細(xì)胞中檢測到較強的Integrinβ4（紅色熒光）及較低的E-cadherin（紅色熒光）表達(dá)；細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示，熒光主要集中在胞膜上。2、與空白對照組相比，在條件實驗組及加入 AICAR的實驗組中 Integrinβ4表達(dá)明顯下調(diào)（P<0.05），而E-cadherin的表達(dá)明顯增加（P<0.05

5、）；在加入 DMSO的條件實驗組中卵巢癌細(xì)胞的Integrinβ4也有明顯的下調(diào)及E-cadherin表達(dá)水平的上調(diào)（P<0.05）;實驗組與條件實驗組的結(jié)果相比，在加入AICAR的實驗組中卵巢癌細(xì)胞AMPKα1 Thr172位點磷酸化的表達(dá)水平比加入DMSO的條件實驗組的高（P<0.05）；AICAR預(yù)處理后的實驗組與空白對照組的細(xì)胞相比較，發(fā)現(xiàn)Integrinβ4綠色熒光明顯降低，而E-cadherin紅色熒光明顯上調(diào)；條件對照組與

6、空白對照組比較，卵巢癌細(xì)胞的Integrinβ4（綠色熒光）也有下調(diào)的趨勢及E-cadherin（紅色熒光）的上調(diào)，但其趨勢沒有實驗組的趨勢明顯。3、免疫熒光結(jié)果顯示，通過BCECF AM（pH－熒光探針）檢測到在空白對照組、條件實驗組及實驗組中的低密度卵巢癌細(xì)胞內(nèi)pH值偏堿性（較亮），而高密度的卵巢癌細(xì)胞內(nèi)pH值偏酸性（較淡）；條件實驗組及實驗組的結(jié)果都有熒光表達(dá)下調(diào)的趨勢，實驗組比條件實驗組的下調(diào)趨勢更明顯。
　　結(jié)論:AIC