重組水蛭素對大鼠撕脫皮瓣存活影響的實驗研究.pdf

1、目的：本實驗通過建立大鼠背部撕脫皮瓣模型,研究重組水蛭素對撕脫皮瓣的保護作用及其機制，并探討重組水蛭素在臨床治療撕脫皮瓣的應用前景。方法：選用健康SD大鼠108只,雌雄不拘,體重(250±50g),隨機分為3組:2個治療組(A組:重組水蛭素治療組, B組:低分子肝素治療組)和1個空白對照組(C組:注射用生理鹽水組),每組36只,按40 mg/kg體重、1％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉,以背部中線為準,蒂位于頭側,設計4cm×6cm大小的長方形

2、隨意皮瓣,蒂部行保護性固定后,遠端用縫線固定于細鐵棒后與精密稱量的重物相連,施予均為8kg的牽拉力,時間均為10秒形成撕脫皮瓣模型,遠端游離緣稍加修剪后原位縫合。分別于術后即刻、12小時、24小時、48小時于皮瓣蒂部、距蒂部2cm和4cm三等分點皮下均勻注射重組水蛭素(2mg/1ml/皮瓣)、低分子肝素(2mg/1ml/皮瓣),空白對照組同法給予注射等量生理鹽水(1ml/皮瓣)。術后觀察皮瓣表面毛發(fā)生長情況,淤血、腫脹情況,皮瓣存活面積

3、;分別檢測術后12h、1d、3d皮瓣遠端組織內P-選擇素含量,3d、5d、7d皮瓣遠端組織內VEGF含量;高倍鏡下觀察術后12h、1d、3d、5d、7d皮瓣遠端組織病理切片內毛細血管內炎性細胞聚集情況及微血栓形成情況。結果：1.大體觀察:術后12、24小時3組皮瓣均出現(xiàn)不同程度的發(fā)紺、腫脹,空白對照組較兩治療組發(fā)紺、腫脹嚴重;空白對照組淤滯帶界限較清晰,治療組淤滯帶界限不清。術后第5、7天,治療組皮瓣遠端發(fā)紺、腫脹逐步消退,存活良好?？?/p>

4、白對照組皮瓣遠端和周緣仍較腫脹,且呈暗黑色,質地變硬,表面毛發(fā)有脫失,未見毛細血管反應,趨向于壞死。術后第14天重組水蛭素組和低分子肝素組存活面積百分比分別為(86.07±1.30)％和(81.46±1.06)％,均比空白對照組(77.03±1.25)％高,有顯著性差異(p<0.01),重組水蛭素組比低分子肝素組皮瓣成活率高,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。2.組織學觀察：術后12h:空白對照組鏡下見組織內大片出血區(qū),充血、水腫明顯,

5、有大量中性粒細胞浸潤;肝素組鏡下見組織內片狀出血、充血,水腫較明顯,有較多中性粒細胞浸潤;重組水蛭素組鏡下見組織內點狀出血,可見充血,水腫,少量中性粒細胞浸潤。1d:空白對照組鏡下見組織內大片出血區(qū),充血、水腫明顯,中性粒細胞呈團塊狀聚集,并可見早期壞死;肝素組鏡下見組織內充血、水腫,中性粒細胞浸潤等均較明顯;重組水蛭素組鏡下見組織內充血、水腫,可見數(shù)量不等的中性粒細胞散在存在。3d:空白對照組鏡下見組織內大片出血,淤血明顯,大量形成炎

6、性肉芽組織,其中可見中性粒細胞散在存在;肝素組鏡下見組織內淤血、水腫,有炎性肉芽組織形成,可見中性粒細胞散在分布;重組水蛭素組鏡下見組織內散在淤血,出血少見,炎性肉芽組織形成,散在的少量中性粒細胞。5d:空白對照組鏡下可見少量片狀出血、淤血,可見微血栓形成,炎性肉芽組織水腫;肝素組鏡下見少量淤血、水腫,炎性肉芽組織較成熟;重組水蛭素組鏡下見少量淤血,炎性肉芽組織成熟。7d:空白對照組鏡下見組織內微血栓形成,毛細血管閉塞,新生毛細血管少;

7、肝素組鏡下見組織內少量微血栓形成,有新生毛細血管;重組水蛭素組鏡下見組織內新生血管增生活躍,肉芽組織成熟。3.P-選擇素含量檢測(pg/ml)：術后第12小時、1天、3天,重組水蛭素組與低分子肝素組P-選擇素含量分別為(129.740±12.302)與(151.584±12.409)、(111.030±6.824)與(134.434±8.707)、(101.674±4.429)與(118.308±7.535),其對應空白組為(196.0

8、34±18.442)、(162.087±14.485)、(132.473±8.142),第12小時、1天、3天重組水蛭素組與低分子肝素組和空白對照組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。4.VEGF含量檢測:術后第3、5、7天,重組水蛭素組與低分子肝素組 VEGF含量分別為(212.507±15.096)與(158.733±15.311)、(214.010±13.811)與(167.134±11.455)、(218.093±13.464

9、)與(177.484±8.183),其對應空白組為(120.454±7.575)、(130.133±19.159)、(133.800±4.882),第3、5、7天重組水蛭素組與低分子肝素組和空白對照組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論：局部注射重組水蛭素能有效抑制P-選擇素的生成,減少炎性細胞的聚集,阻斷微血栓的形成,改善撕脫皮瓣局部缺血、缺氧狀態(tài);減弱內皮細胞的損傷,促進VEGF的表達,刺激新生毛細血管增生,提高撕脫皮瓣的存活