大鼠活體碾壓傷皮瓣顯微鏡觀察模型的建立及VNP對碾壓撕脫皮瓣保護作用機制的研究.pdf

1、隨著我國經(jīng)濟建設的調整發(fā)展和現(xiàn)代交通工具的迅猛增加，由交通事故和機械損傷所造成的皮膚碾壓撕脫傷已成為臨床的一種常見損傷。與普通的切割傷不同，皮膚碾壓撕脫傷損傷程度重，并發(fā)癥多，在臨床救治中，應盡可能保留有血運的撕脫皮瓣。但往往手術時尚有血液循環(huán)反應的碾壓撕脫組織，在術后逐漸發(fā)生栓塞壞死，即發(fā)生皮瓣的繼發(fā)性壞死，造成患者術后外形不佳和后遺畸形等。因此，皮膚撕脫傷的救治已成為整形外科領域的重要研究課題之一。本課題就是在我科建立的小型動物皮膚

2、碾壓撕脫傷模型的基礎上，進一步研究皮膚碾壓撕脫傷的損傷機制，并使用一種新型的藥物——血管鈉肽（VNP），研究其對碾壓撕脫皮瓣的保護作用，以期為臨床治療提供一種新思路。
　　本課題的動物模型是應用我們自行研制的碾壓撕脫模型機建立的，在大鼠背部設計為蒂在尾部的縱行3cm×9cm大小任意皮瓣，并將此皮瓣放于碾壓撕脫模型機上進行碾壓，實踐證實此模型機可構建出穩(wěn)定的碾壓撕脫傷模型。利用熒光標記原理，在皮瓣碾壓前后將皮瓣置于活體顯微觀察窗上，

3、我們成功在活體大鼠上構建了動態(tài)觀察碾壓傷皮瓣微循環(huán)改變的體內模型，通過觀察被標記的白細胞，可測定碾壓前后皮瓣微血管血流速度、功能性毛細血管密度、白細胞黏附及血栓形成等微循環(huán)改變情況。結果顯示碾壓后微血管血流速度及功能性毛細血管密度較碾壓前明顯降低（P＜0.01），碾壓后30min即可見明顯血栓形成及其形成過程，最終出現(xiàn)大量無血液灌流的毛細血管及大量微血栓的形成。
　　碾壓撕脫傷后7天我們對各組皮瓣的成活率進行了分析，結果顯示采用V

4、NP治療可顯著提高碾壓撕脫皮瓣的成活面積。為了研究血管鈉肽（VNP）對碾壓撕脫皮瓣的保護機制，我們在大鼠術后不同時間點，通過免疫組化、雙抗夾心ELISA和生物化學分析方法，對不同組間皮瓣組織的P-選擇素、L-選擇素，血清和局部組織液中的TNF-α、IL-β及IFN-γ含量，以及組織中MPO、MDA和GSH-PX等成分進行了分析。P-選擇素和L-選擇素是重要的粘附分子，導白細胞的粘附滲出和微血栓的形成，是引起皮瓣繼發(fā)性壞死的關鍵因素。在碾

5、壓撕脫傷發(fā)生后早期，即可觀察到P-選擇素和L-選擇素的表達水平明顯上調，而VNP則通過抑制他們的表達（P＜0.05），進而減輕傷后白細胞貼壁粘附和血栓形成以及中性粒細胞浸潤的炎癥級聯(lián)反應。作為重要的炎癥因子，TNF-α、IL-β及IFN-γ的含量也在傷后有明顯的升高，尤以局部組織液中的含量變化水平最為明顯，而VNP治療后可顯著減低這些炎癥因子的水平（P＜0.05），減輕炎癥反應，從而減輕了組織損傷程度，提高皮瓣成活率。從VNP對碾壓撕脫

6、傷后MPO、MDA和GSH-PX水平的影響結果來看，VNP在碾壓傷后對抗活性氧自由基，提高組織抗氧化能力等方面同樣起到了積極的作用，從而減輕皮瓣組織中毛細血管內皮細胞損傷。通過激光多普勒血流儀和組織切片的觀察，了解碾壓撕脫傷后組織的灌流和損傷情況，結果顯示：碾壓撕脫傷發(fā)生后皮瓣中、遠端血流顯著降低，而VNP治療組的血流情況得到了明顯改善（P＜0.05）；組織切片也顯示，使用VNP進行治療后組織損傷明顯減輕，白細胞浸潤減少，血栓形成減少。