重組水蛭素誘導(dǎo)bFGF表達(dá),促進(jìn)靜脈淤血皮瓣存活的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立兔耳靜脈淤血皮瓣模型,分別以高劑量重組水蛭素、低劑量重組水蛭素、注射生理鹽水于局部注射,研究重組水蛭素誘導(dǎo)靜脈淤血皮瓣bFGF的表達(dá),促進(jìn)微血管增生,從而提高靜脈淤血皮瓣的存活率,進(jìn)一步探討重組水蛭素在靜脈淤血皮瓣領(lǐng)域的應(yīng)用前景。
　　 方法:健康普通大耳白兔72只,雌雄不拘,體重(2000±200g),隨機(jī)分為3組:2個(gè)治療組(A組:高劑量重組水蛭素治療組和B組:低劑量重組水蛭素治療組)和1個(gè)對(duì)照組(C組:

2、注射生理鹽水組),每組24只,按40 mg／kg體重、2％戊巴比妥鈉左耳緣靜脈注射麻醉,麻醉后側(cè)臥位,消毒鋪無(wú)菌巾。于右耳背部設(shè)計(jì)含耳中央動(dòng)靜脈、神經(jīng)為蒂(蒂寬1cm)的寬為4cm、長(zhǎng)為6cm的軸型皮瓣。顯微手術(shù)操作分離出耳中央動(dòng)靜脈和神經(jīng),耳中央靜脈和神經(jīng)于蒂部切斷,一并結(jié)扎其他旁支靜脈,形成淤血皮瓣模型。治療組分別在術(shù)后即刻、術(shù)后2小時(shí)、術(shù)后8時(shí)、術(shù)后16小時(shí)、第2、4、6天給予皮瓣蒂部皮下三等分點(diǎn)均勻注射重組水蛭素(2mg／1ml

3、／皮瓣)和(1mg／1ml／皮瓣),空白對(duì)照組同法給予等量(1ml)生理鹽水,皮瓣原位回植。術(shù)后觀察皮瓣表面毛發(fā)脫落情況,血腫形成情況,皮瓣存活率,分別于術(shù)后1、3、5、7天取遠(yuǎn)端病理組織檢測(cè)皮瓣內(nèi)bFGF水平,同時(shí)制備術(shù)后1、3、5、7天皮瓣遠(yuǎn)端組織病理切片于高倍鏡視野下做微血管密度分析,并做免疫組化觀察各組毛細(xì)血管生成情況及MVD與bFGF表達(dá)。
　　 結(jié)果:1.大體觀察:術(shù)后第1天3組皮瓣遠(yuǎn)端均出現(xiàn)不同程度的組織腫脹淤血,

4、空白組較高劑量重組水蛭組和低劑量重組水蛭素組淤血程度明顯,呈暗紫色,高劑量重組水蛭素組和低劑量重組水蛭素組淤血帶界限不明顯,空白組淤血帶界限明顯。術(shù)后第3、7天,高劑量重組水蛭素組和低劑量重組水蛭素組皮瓣遠(yuǎn)端淤血腫脹逐步減退直至基本消散,愈合良好?？瞻讓?duì)照組皮瓣遠(yuǎn)端和周緣顏色發(fā)黑,質(zhì)硬,局部毛發(fā)脫落,無(wú)毛細(xì)血管反應(yīng),趨于壞死。術(shù)后第7天高劑量重組水蛭素組和低劑量重組水蛭素組成活面積百分比分別為(94.64±1.90)％和(94.64±1

5、.90)％,均比空白對(duì)照組(78.86±1.08)％高,有顯著性差異(p<0.01),高劑量重組水蛭素組與低劑量重組水蛭素組皮瓣成活率相當(dāng),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。2.微血管密度(MVD)[1]:取各試驗(yàn)組第1、3、5、7天病理切片,將胞漿呈黃染的與周圍其他組織有明顯界限的內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞串,無(wú)論有無(wú)管腔,計(jì)數(shù)為1個(gè)血管。先在低倍鏡下(×100)選擇內(nèi)皮細(xì)胞染色最多的區(qū)域,再在高倍鏡(HP,×400)下計(jì)數(shù)這一區(qū)域的血管個(gè)數(shù)

6、,記錄每高倍視野的血管數(shù),選最大的3個(gè)數(shù)值的平均數(shù)作為MVD。第1天各實(shí)驗(yàn)組未見(jiàn)明顯毛細(xì)血管生成,第3、5、7天高劑量重組水蛭素組和低劑量重組水蛭素組毛細(xì)血管數(shù)量／HP分別為(8.5±0.9)與(5.6±0.7)、(11.6±0.8)與(8.5±1.0)和(12.0±0.5)與(8.9±1.0),均比空白組(3.5±0.8)、(3.0±0.7)和(2.3±0.6)高,其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.bFGF含量檢測(cè)(pg／ml):術(shù)后第1、3

7、、5、7天,高劑量重組水蛭素組與低劑量重組水蛭素組bFGF含量分別為(47.32±2.04)與(49.54±2.15)、(69.12±1.68)與(54.76±1.52)、(82.70±0.61)與(60.11±0.72)和(84.48±0.82)與(64.55±0.63),其對(duì)應(yīng)空白組為(49.15±1.42)、(50.06±1.45)、(48.10±0.24)和(50.32±0.51),第3、5、7天高劑量重組水蛭素組和低劑量重組水

8、蛭素組與空白對(duì)照組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),第5、7天高劑量重組水蛭素組與低劑量重組水蛭素組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),余各實(shí)驗(yàn)組相互比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。4.MVD與bFGF表達(dá):高劑量重組水蛭素組和低劑量重組水蛭素組與空白對(duì)照組于1、3、5、7天MVD與bFGF表達(dá)水平呈明顯正相關(guān)(r=0.368,P<0.01),第3、5、7天高劑量重組水蛭素組與低劑量重組水蛭素組MVD與bFGF表達(dá)水平呈明