IL-6、ICAM-1、ApoE血清水平及基因多態(tài)性與冠心病證侯關(guān)系研究.pdf

1、研究背景: 迄今為止，冠心病(CHD)的傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素僅能解釋大約一半CHD患者的發(fā)病原因，另一半患者的發(fā)病可能需應(yīng)用遺傳危險(xiǎn)因素加以解釋。發(fā)掘CHD發(fā)病新的遺傳危險(xiǎn)因素、從微觀水平探討CHD發(fā)病的遺傳易感機(jī)理是目前CHD病因?qū)W研究的主要方向之一?，F(xiàn)已證實(shí)，炎性因子與動(dòng)脈粥樣硬化(冠心病病理學(xué)基礎(chǔ))的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。在粥樣硬化斑塊區(qū)的脂質(zhì)核心及破裂斑塊的“肩區(qū)”，可以觀察到大量的免疫細(xì)胞如單核細(xì)胞源性的巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞等，

2、這些免疫細(xì)胞參與了動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)的全過程。當(dāng)血管內(nèi)皮因各種因素受損后，局部發(fā)生炎癥反應(yīng)，一方面表達(dá)多種粘附分子(如粘附分子-1)，介導(dǎo)單核細(xì)胞和 T 細(xì)胞的滾動(dòng)、粘附、遷移和聚集；另一方面又分泌致炎因子如腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor, TNF)、白細(xì)胞介素-1 (interleukin-1，IL-1)、白細(xì)胞介素-6 (interleukin-6，IL-6)等，這些致炎因

3、子在內(nèi)皮下使單核細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉?xì)胞，攝入氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein，ox-LDL)，進(jìn)一步分泌 TNF,IL-1 等致炎因子，進(jìn)而趨化、招募炎性細(xì)胞，增強(qiáng)局部炎癥反應(yīng)，使粥樣斑塊病變逐漸趨向于復(fù)雜化，增加AS斑塊的不穩(wěn)定性。因此，炎性因子在介導(dǎo)炎癥反應(yīng)所致血管內(nèi)皮損傷一修復(fù)過程中起著非常重要的免疫調(diào)節(jié)作用。 隨著分子生物學(xué)研究發(fā)展，越來越多的證據(jù)表明炎性因子存在基因多態(tài)性

4、，而且，這些炎性因子基因多態(tài)性可以通過影響自身及其他細(xì)胞因子的表達(dá)水平及生物學(xué)活性，導(dǎo)致某些疾病的發(fā)生、發(fā)展。影響炎性因子產(chǎn)生能力或影響炎性細(xì)胞對(duì)炎癥刺激因素反應(yīng)程度的基因多態(tài)性可以影響動(dòng)脈粥樣硬化、CHD的發(fā)生，研究炎性因子基因多態(tài)性對(duì)CHD發(fā)病的影響具有重要意義。證候是中醫(yī)基礎(chǔ)理論的核心之一，與體質(zhì)關(guān)系密切，而先天稟賦差異是個(gè)體體質(zhì)差異的決定因素，是證候易感性和變化趨向性差異的內(nèi)因，因此，從結(jié)構(gòu)基因組的角度分析基因多態(tài)性與證候的相關(guān)

5、性，就能從生理層面預(yù)測證候的發(fā)生、發(fā)展、變化的可能途徑，達(dá)到中醫(yī)“治未病”的目的。 本課題選擇IL-6、ICAM-1、ApoE三個(gè)重要的細(xì)胞因子，進(jìn)行基因多態(tài)性與CHD 易感性的相關(guān)性研究。同時(shí)對(duì)冠心病中醫(yī)痰瘀證候基因多態(tài)性進(jìn)行相關(guān)分析，以期能闡明痰瘀證的致病機(jī)理及本質(zhì)；同時(shí)從基因水平進(jìn)一步認(rèn)識(shí)證的本質(zhì)，以提高冠心病的中醫(yī)診治水平。 方法：選擇符合條件的CHD 痰證、瘀證、痰瘀互結(jié)證患者97例，另選35名健康志愿者作為對(duì)

6、照，運(yùn)用酶聯(lián)免疫法 (ELS)檢測所有樣品的 ICAM-1、IL-6和 ApoE 血清水平，提取全血 DNA，用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragment lengthpoly-morphism,PCR-RFLP)技術(shù)檢測三者基因型，采用SPSS軟件進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果與結(jié)論： 1、CHD組與對(duì)照組比較，IL-6、ICAM-1、Apo

7、E 血清水平差異有顯著性意義 (P<0.01)，提示三者血清水平與CHD 發(fā)病有關(guān)，并可能是診斷冠心病的一種非侵入性指標(biāo)。 2、CHD 組痰瘀諸證IL-6、ICAM-1、ApoE 血清水平比較，瘀證組、痰瘀互結(jié)組IL-6 血清水平較痰證組增高，差異有顯著性意義(P<0.05)；痰證、痰瘀證組ICAM-1血清水平較瘀證組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；痰瘀證組、瘀證組ApoE血清水平高于痰證組，差異有顯著性意義(P<0.05

8、)。 3、CHD組患者IL—6基因—174 位點(diǎn)多態(tài)性分布與健康對(duì)照組比較無顯著性差異(P>0.05)，提示此位點(diǎn)多態(tài)性與 CHD 發(fā)病關(guān)系不大；ICAM-1K469E 基因型在兩組間分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，等位基因頻率在兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。E等位基因的患病風(fēng)險(xiǎn)明顯高于K等位基因，E等位基因患CHD風(fēng)險(xiǎn)是K等位基因的4.65倍，提示CHD 發(fā)病可能與ICAM-1 E等位基因突變有關(guān)；CHD組ApoEE3/4 基因型頻率明顯高于對(duì)

9、照組 (P<0.01)，E4 等位基因頻率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，OR值為4.065，95％cl分別為0.996～7.126，表明E4等位基因變異與CHD發(fā)病顯著相關(guān)。 4、在IL-6、ICAM-1、ApoE 基因多態(tài)性與 CHD 痰瘀證關(guān)系上，IL—6基因-174G/C 多態(tài)性及 ICAM-1K469E 基因多態(tài)性分布在三組中并無明顯差異(P>0.05)：ApoEE3/4 基因型和 E4 等位基因頻率在痰證患者中明顯高

10、于痰瘀證及瘀證患者(P<0.05)，變異等位基因E4攜帶者更傾向于發(fā)生痰證，表明E4等位基因，特別是E 3/4 基因型可能是冠心病及中醫(yī)痰證的主要易感基因之一。但由于本研究樣本量偏小，仍需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本以明確判斷。 5、經(jīng)Logistic 分析，吸煙、糖尿病、LDL-C、TG、IL-6、ICAM-1 均為 CHD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，而IL—6基因—174 位點(diǎn)多態(tài)性及 ICAM-1K469E 基因多態(tài)性并非CHD危險(xiǎn)