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文檔簡介
1、目的:(1)探索泛素蛋白連接酶MuRF1(muscleRINGfingerprotein1)和核轉(zhuǎn)錄因子kappaB(nuclerfactorofkappaB,NF-κB)在大鼠失神經(jīng)骨骼肌不同時間段的表達。(2)探索被動運動對失神經(jīng)骨骼肌不同時間段MuRF1和NF-κB表達的影響。
方法:選42只健康雄性的wistar大鼠,隨機分為空白對照組(正常組),失神經(jīng)對照組(失神經(jīng)2d組、失神經(jīng)14d組、失神經(jīng)28d組)和實驗組
2、(失神經(jīng)被動運動2d組、失神經(jīng)被動運動14d組、失神經(jīng)被動運動28d組)。
大鼠分批用戊巴比妥鈉(40mg/kg,ip)麻醉后,用右下肢后部中段切斷坐骨神經(jīng)的方法制作失神經(jīng)骨骼肌動物模型,正常組僅做假手術(shù)(不切斷坐骨神經(jīng)),去神經(jīng)組切斷坐骨神經(jīng)1cm以上,分別于去神經(jīng)第2d、14d、28d處死大鼠(用脊椎脫臼法),用顯微外科技術(shù)認真游離失神經(jīng)骨骼肌(腓腸肌),切取的肌肉樣本快速置于-80℃冰箱凍存,備用。
利
3、用肌濕重比測定肌肉萎縮程度并采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)與免疫印跡法(Westernblot法)技術(shù)分別檢測MuRF1與NF-κBmRNA和蛋白質(zhì)不同時間段的表達量,利用spss軟件分析MuRF1與NF-κBmRNA和蛋白質(zhì)的表達變化規(guī)律以及與肌萎縮的相關(guān)性。
結(jié)果:大鼠失神經(jīng)2d、14d和28d組腓腸肌中MuRF1與NF-κB基因和蛋白質(zhì)表達較正常對照組明顯增加,P<0.05,同一時間段實驗組MuRF1和NF-
4、κB基因和蛋白質(zhì)表達低于失神經(jīng)對照組,P<0.05。失神經(jīng)不同時段干預(yù)組腓腸肌肌濕重比高于同期失神經(jīng)對照組,P<0.05。在失神經(jīng)對照組中Murf1和NF-κBmRNA和蛋白質(zhì)表達與肌濕重呈負相關(guān)(r=-0.795,p<0.01;r=-0.834,p<0.01)。
結(jié)論:大鼠失神經(jīng)骨骼肌不同時間段MuRF1和NF-κB的基因與蛋白質(zhì)表達較正常組明顯增加,且與肌萎縮的發(fā)生呈一定的相關(guān)性。被動運動可能通過降低MuRF1和NF-
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