抗癲癇藥致周圍神經(jīng)損傷及其防治的實(shí)驗(yàn)性研究.pdf

1、第一部分常用抗癲癇藥對(duì)周圍神經(jīng)損傷的實(shí)驗(yàn)研究 目的：探討常用抗癲癇藥對(duì)周圍神經(jīng)的損傷作用。 方法：成年(2月齡)和嬰幼(7 日齡)大鼠各 8 組(n=16)，分別灌喂PHT(62.5mg/kg.d)、PB (30.0 mg/kg.d)、VPA (3 12.5 mg/kg.d)、CZP (1.25mg/kg.d)、CBZ (187.5 mg/kg.d)、TPM (40 mg/kg.d)、OXC (312.5mg/kg.d)

2、和等體積0.5％CMC用作對(duì)照，用藥 4 周后成年鼠行坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度檢查，然后每組隨機(jī)取8只采集坐骨神經(jīng)和脊髓標(biāo)本用于本部分和第二部分實(shí)驗(yàn)，余下一半停藥4周后再處死取標(biāo)本。成年和嬰幼鼠坐骨神經(jīng)標(biāo)本分別作原纖維分離、半薄切片和電鏡觀察。計(jì)數(shù)原纖維病變發(fā)生率，以及病變性質(zhì)。 結(jié)果：①除TMP和VPA組外，各用藥組中至少有1只大鼠存在坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)功能異常。②除TMP外，其余 6 種 AEDs 均同時(shí)引起成年和嬰幼大鼠顯著但程度不同的

3、神經(jīng)原纖維病變(7.2％～20.2％)。尤以 PHT 最明顯，兩年齡組病變纖維發(fā)生率均高達(dá)20％左右。其后依次是PB(成年鼠)或VPA(嬰幼鼠)、CBZ、CZP和OXC等。病變性質(zhì)以髓鞘脫失為主。③兩年齡組之間原纖維病變率沒有明顯差異。停藥后的嬰幼鼠自我修復(fù)能力遠(yuǎn)較成年鼠強(qiáng)。 結(jié)論：PHT、PB、CBZ、VPA、CZP、OXC 都存在誘發(fā)周圍神經(jīng)損傷的不同程度可能性，主要表現(xiàn)為髓鞘脫失。嬰幼鼠具有與成年鼠相同發(fā)生率和幾乎一致的敏

4、感性，停藥后恢復(fù)均較緩慢，但嬰幼鼠較成年鼠顯著。 第二部分抗癲癇藥物誘發(fā)周圍神經(jīng)損傷機(jī)制的探討 目的：探討抗癲癇藥物誘發(fā)周圍神經(jīng)損傷的可能機(jī)理。 方法：以第一部分實(shí)驗(yàn)中 AEDs 用藥 4 周組動(dòng)物取坐骨神經(jīng)和脊髓標(biāo)本作如下檢查：①脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元凋亡檢測(cè)：脊髓腰膨大切片免疫組化檢測(cè)Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)以及凋亡神經(jīng)元TUNEL檢測(cè)；②血清和坐骨神經(jīng)組織的抗氧化能力檢測(cè)：以相應(yīng)的試劑盒分別檢測(cè)T-AOC、S

5、OD和GSH-PX活性；③用試劑盒檢測(cè)血清和坐骨神經(jīng)NO含量以及NOS活性。 結(jié)果：①嬰幼鼠PB、CZP和VPA給藥組脊髓前角Bax蛋白表達(dá)分別是正常對(duì)照的2.15、1.82和2.41倍，Bax/Bcl-2比值也分別是同齡對(duì)照組1.94、1.66及2.21倍。7種 AEDs 對(duì)成年鼠和PHT、CBZ、OXC和TPM對(duì)嬰幼鼠脊髓Bax蛋白表達(dá)無明顯影響。與Bax檢測(cè)結(jié)果一致，僅在PB、CZP和VPA嬰幼鼠脊髓前角見TUNEL陽性細(xì)

6、胞顯著增多；②PHT、CZP、CBZ和OXC均可導(dǎo)致成年和嬰幼大鼠血清與坐骨神經(jīng)T-AOC不同程度降低。PHT、PB、CZP、CBZ和 OXC 等5 種 AEDs同時(shí)引起成年與嬰幼大鼠血清和坐骨神經(jīng)SOD活力一致性下降。PHT、PB、VPA、CZP、CBZ和OXC同時(shí)導(dǎo)致成年和嬰幼鼠血清GSH-PX活性顯著下降。PHT、PB、CBZ和OXC同時(shí)引起兩個(gè)年齡組坐骨神經(jīng)GSH-PX活性降低。CZP尚對(duì)嬰幼鼠坐骨神經(jīng)GSH-PX活性有明顯影響

7、；③兩年齡PB組血清和坐骨神經(jīng)NOS活性較對(duì)照組顯著性升高；PB可引起成年鼠血清以及嬰幼鼠血清與坐骨神經(jīng)。NO含量顯著升高。其余各AEDs成年和嬰幼組NOS/NO沒有顯著變化。 結(jié)論：①盡管PB、CZP和VPA確實(shí)引發(fā)了脊髓前角神經(jīng)元的過度凋亡，但大鼠所發(fā)生的 AEDs 周圍神經(jīng)損傷與其脊髓神經(jīng)元受損并不存在因果關(guān)系；②PHT、PB、VPA、CZP、CBZ和OXC所致周圍神經(jīng)損傷與這些藥物破壞體內(nèi)、尤其神經(jīng)組織內(nèi)超氧化—抗氧化平

8、衡，導(dǎo)致周圍神經(jīng)組織氧化應(yīng)激狀態(tài)有密切關(guān)系；③除PB外，NO不是多數(shù)AEDs致周圍神經(jīng)損傷的主要因素。 第三部分抗氧化劑對(duì)AEDs周圍神經(jīng)損傷的防治作用 目的：探討抗氧化劑VitE和GBE對(duì)AEDs周圍神經(jīng)損傷的防治作用。 方法：成年(2月齡)和嬰幼(7日齡)SD大鼠各56只，各自隨機(jī)分為7個(gè)組：PHT+VitE、PB+VitE、CZP+VitE和pHT+GBE、PB+GBE、CZP+GBE，和空白對(duì)照(CG)組

9、。3種AEDs劑量同前，VitE和GBE各按100mg/kg.d計(jì)量。CG為等體積0.5％CMC另以第二部分單用AEDs組為陽性對(duì)照。根據(jù)體重增長(zhǎng)隨時(shí)調(diào)整 AEDs 劑量。用藥4周后處死動(dòng)物，采集血清、坐骨神經(jīng)和脊髓標(biāo)本。分別用作：①坐骨神經(jīng)組織病理學(xué)檢測(cè)：包括原纖維分離、半薄切片和電鏡觀察；②脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的凋亡檢測(cè)：免疫組化檢測(cè)Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)以及 TUNEL 凋亡細(xì)胞；③血清和坐骨神經(jīng)組織的抗氧化能力：包括T-AOC

10、、SOD和GSH-PX活性檢測(cè)；④血清和坐骨神經(jīng)NO含量以及NOS活性檢測(cè)。 結(jié)果：①在所有成年或嬰幼大鼠并用VitE或GBE的AEDs用藥組中，坐骨神經(jīng)原纖維病變率均顯著地低于未加抗氧化劑組(p<0.01)。無論成年或嬰幼組，GBE的防治效果均明顯優(yōu)于 VitE，存在非常顯著性差異(P<0.01)；② PB+GBE 和 CZP+GBE 嬰幼組脊髓神經(jīng)元Bax蛋白表達(dá)較單用PB或CZP顯著下降(P<0.01)，補(bǔ)充VitE卻不能

11、顯著減少這兩組嬰幼鼠Bax蛋白表達(dá)。其余各組與CG組比較未見顯著性差異；③合并使用抗氧化劑VitE或 GBE 均可顯著或非常顯著地糾正AEDs 對(duì)體內(nèi)(血清和周圍神經(jīng))T-AOC、SOD和GSH-PX活性的抑制(P<0.05或P<0.01)。VitE的各組對(duì)SOD和GSH-PX活性增加均稍優(yōu)于GBE，部分差異達(dá)顯著性；④補(bǔ)充GBE可顯著降低PB誘導(dǎo)的血清或坐骨神經(jīng)NOS/NO增高，VitE亦有改善NOS/NO的趨勢(shì)，但未達(dá)顯著差異水平。