牙鲆嗜水氣單胞菌的分離鑒定及其滅活疫苗的研制.pdf

1、牙鲆是我省珍貴的經(jīng)濟(jì)魚類之一，目前在中國(guó)北方沿海地區(qū)大規(guī)模養(yǎng)殖，隨著高密度工廠化養(yǎng)殖的迅速發(fā)展和海水污染的日益嚴(yán)重，危害養(yǎng)殖牙鲆的各種病原相繼出現(xiàn)，這些細(xì)菌所引起的大規(guī)模暴發(fā)病給海水養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。 本實(shí)驗(yàn)從河北唐山會(huì)達(dá)水產(chǎn)公司和普林海珍養(yǎng)殖的患腹水病褐牙鲆體內(nèi)分離致病菌，通過包括革蘭氏染色，氧化酶鑒定，微量生化鑒定，藥物敏感試驗(yàn)測(cè)定等生理生化鑒定方法對(duì)該菌進(jìn)行了鑒定；本試驗(yàn)還根據(jù)NCBI上報(bào)道的嗜水氣單胞菌標(biāo)準(zhǔn)株的

2、16S rDNA序列以及致病性嗜水氣單胞菌所含有的氣溶素(aer)設(shè)計(jì)了兩對(duì)引物，對(duì)所分離到的2株疑似菌以及三株標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，均能夠擴(kuò)增出目的條帶，經(jīng)測(cè)序后，該菌的16S rDNA的序列，aer序列與標(biāo)準(zhǔn)株同源性分別達(dá)到98％和95％，與常規(guī)細(xì)菌鑒定方法所得結(jié)果一致，證明該菌為嗜水氣單胞菌。 本實(shí)驗(yàn)將所分離到的嗜水氣單胞菌用終濃度為0.2‰0.5％的甲醛對(duì)菌體進(jìn)行滅活，制備了滅活疫苗，并優(yōu)化滅活疫苗的滅活條件；將制備的滅

3、活疫苗分別注射小鼠和牙鲆，均取得了較為理想的效果，其中小鼠的免疫保護(hù)率達(dá)到80％，牙鲆的免疫保護(hù)率達(dá)到70％；采用滲透壓差法大規(guī)模浸泡免疫牙鲆也取得了很好的效果，浸泡免疫過的牙鲆發(fā)病率僅為6％，攻毒后免疫保護(hù)率為85％；通過應(yīng)用間接ELISA方法檢測(cè)受免動(dòng)物的抗血清，并將牙鲆的抗血清注射新西蘭白兔，從而獲得兔抗魚血清，更便于檢測(cè)，結(jié)果都表明動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生了較高的抗體水平；剖檢攻毒后的動(dòng)物，發(fā)現(xiàn)免疫過的動(dòng)物內(nèi)臟健康無(wú)異樣，表明該疫苗安全有效