哈銳炭疽菌FSTF基因功能研究及BnWRKY75油菜轉(zhuǎn)化子防御酶的檢測(cè).pdf

1、柿樹(shù)炭疽病是哈銳炭疽菌(Colletotrichum horii)引起的柿樹(shù)重要病害，嚴(yán)重時(shí)可對(duì)柿產(chǎn)業(yè)造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。哈銳炭疽菌初次侵染柿樹(shù)時(shí)，會(huì)經(jīng)歷無(wú)癥狀階段（或稱活體營(yíng)養(yǎng)階段）和有明顯癥狀的危害階段這兩個(gè)階段，即經(jīng)歷一定時(shí)間的活體營(yíng)養(yǎng)，再殺死寄主細(xì)胞，向死體營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)換。推測(cè)哈銳炭疽菌FSTF(Fungalspecific transcriptional factor)基因可能和活體營(yíng)養(yǎng)相關(guān)，但尚無(wú)實(shí)驗(yàn)證據(jù)。為了研究哈銳炭疽菌FST

2、F基因的功能，本文分別設(shè)計(jì)了哈銳炭疽菌FSTF基因的左臂和右臂引物，左臂引物引入EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位點(diǎn)，右臂引物引入PstⅠ和HindⅢ酶切位點(diǎn)，以哈銳炭疽菌基因組DNA為模板通過(guò)PCR克隆得到FSTF基因的左臂和右臂，連接于pMD19-T載體。從其它載體上克隆得到潮霉素抗性基因，通過(guò)引物引入XbaⅠ酶切位點(diǎn)，并連接于pMD19-T載體。將上述重組載體用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶酶切，按照左臂+潮霉素抗性基因+右臂的順序連接到pCAMB

3、IA-1300載體，構(gòu)建出哈銳炭疽菌FSTF基因的敲除載體pCAMBIA-1300-H-L-R。
　　WRKY75是植物WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員。核盤(pán)菌（Sclerotiniasclerotiorum）可侵染油菜引發(fā)油菜菌核病，對(duì)油菜危害極大。有研究發(fā)現(xiàn)油菜在受到菌核病侵染的過(guò)程中，其WRKY75（BnWRKY75）的轉(zhuǎn)錄本水平會(huì)劇烈上升，但目前對(duì)BnWRKY75在油菜抵御菌核病侵染過(guò)程中的作用仍不夠了解。本實(shí)驗(yàn)室已獲得一些B